目錄:上海帛科生物技術有限公司>>基因檢測PCR試劑盒>>RNA/DNA提取試劑盒>> Bicine Buffer
PCR實驗步驟：
①取凍存已裂解的細胞，室溫放置5分鐘使其*溶解。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的lvfang，蓋緊管蓋。手動劇烈振蕩管體15秒后，15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚lvfang相，中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時加入的TRIZOL試劑的60%。
③RNA沉淀 將水相上層轉移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA，混勻后15到30℃孵育10分鐘后，于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制)，清洗RNA沉淀。混勻后，4℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時，先加入無RNA酶的水40μl用槍反復吹打幾次，使其*溶解，獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法測定先用稀釋用的TE溶液將分光光度計調零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后，讀取其在分光光度計260nm和280nm處的吸收值，測定RNA溶液 濃度和純度。
原理是由一對引物介導，能在動植物體外對特定基因(DNA)片斷進行快速酶促擴增，經過n個熱循環擴增，擴增產物中所含特定基因數是原始模板數的(1+E)n(0＜E＜1,擴增效率＝倍，使得檢測擴增產物中的特定基因成為可能。產品僅用于科研
特異性強
PCR反應的特異性決定因素為：
①引物與模板DNA特異正確的結合；
②堿基配對原則；
③Taq DNA聚合酶合成反應的忠實性；
④靶基因的特異性與保守性。
產品名稱：Bicine Buffer
產品規格： 詳見說明
產品貨號：BK-P96651
儲存條件：-20℃避光保存，避免反復凍融。
運輸：低溫、避光，快遞免費送貨上門。
產品特點：
◇高特異性：與其他病毒無交叉反應，無非特異性擴增；
◇高靈敏度：檢測靈敏度可達10~100拷貝；
◇操作簡便：該系列所有試劑均采用相同的體系和條件，可同時進行多個檢測；
◇高通量：多種雙重PCR檢測以及三重PCR檢測試劑盒。
產品特點：
1. 使用化學修飾的熱啟動聚合酶，反應特異性高，*程度地避免了非特異擴增；
2. 反應緩沖液經充分優化，反應靈敏快速，40個循環只需20多分鐘；
3. 抗干擾能力強，反應重復性高，適合對土壤、糞便、腫瘤和血液來源的復雜樣本中的靶基因進行檢測分析。
在PCR反應體系中加入熒光基團，利用熒光信號積累實時監測整個PCR進程，zui后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。
特異性熒光標記：
TaqMan法
TaqMan探針的特性：
（1）5′端標記有報告基團（Reporter, R），如FAM、VIC等
（2）3′端標記有熒光淬滅基團 （Quencher, Q）
（3）探針完整，R所發射的熒光能量被Q基團吸收 ，無熒光， R與Q分開，發熒光
（4）Taq酶有 5′→3′外切核酸酶活性，可水解探針
相對定量通過內標定量：
內標（Endogenous Control）通常是β-actin、GAPDH基因等看家基因，在細胞中的表達量或在基因組中的拷貝數恒定，受環境因素影響小，內標定量結果代表了樣本中所含細胞或基因組數量。
實驗注意事項：
1）RT-PCR可以檢測組織、細胞、血液、細菌等很多材料，不同的樣本有不同要求，實驗前請充分溝通確認實驗方案和樣本情況；
2）客戶盡可能提供實驗的背景信息、物種、基因準確的名稱和ID號；
3）客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4）樣本保存于液氮或干冰，也可以保存于Trizol液中。
實時熒光定量PCR（quantitative real-time PCR，qPCR）是指在PCR反應體系中加入熒光基團，利用熒光信號積累實時監測整個PCR進程，最后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。實時熒光定量PCR的化學原理包括探針類和非探針類兩類，探針類是利用與靶細胞序列特異性雜交的探針來指示擴增產物的增加，非探針類是利用熒光染料或者特異性設計的引物來指示擴增的增加。運用該技術可以對DNA、RNA樣品進行定量（包括絕對定量和相對定量）和定性分析。
主要服務：DNA或RNA的絕對定量分析、基因表達差異分析、基因分型。
主要技術：引物設計、RNA提取、cDNA合成、qPCR。
雙重酯酶染液20片/箱 HumanCaspase12,Casp-12ELISA試劑盒人胱天蛋白酶12(Casp-12)ELISA試劑盒規格：96T/48T
無水硫酸鈉(分析標準品,pestizides≤1 ppm) sulfate anhydrous質量規格：分析標準品,pestizides≤1 ppm 人活化凝血因子X(FXa)試劑盒 Human FXa ELISA kit 人凝血因子Ⅹ(FⅩ)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
甲嘧磺隆(標準品)Sulfometuron-methyl質量規格：分析標準品 RatCollagenaseIELISAKit大鼠膠原酶I(CollagenaseI)ELISA試劑盒規格：96T/48T 小鼠細胞色素C(Cyt-C)試劑盒 Mouse Cytochrome-C,Cyt-C ELISA Kit
西草凈(分析標準品,97%)Simetryne質量規格：分析標準品,97% 10摩爾AmmoniumAcetate分子生物級溶液100毫升 基孔肯雅病毒(CHIKV)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法) 48T
喹禾靈(分析標準品,96%)Quizalofop-ethyl質量規格：分析標準品,96% MouseCoisolELISA試劑盒小鼠皮質醇(Coisol)ELISA試劑盒規格：96T/48T Humanserine/threonineproteinkinase,STKELISA試劑盒人絲氨酸/蘇氨酸蛋酸酶(STK)ELISA試劑盒規格：96T/48T
牛磺豬去氧膽酸鈉質量規格：≥98%,美國進口 taurohyodeoxycholate hydrate CLIAKitforvaspin(MouseVisceraladipose-specificserineproteaseinhibitor)ELISAKit小鼠內臟脂肪特異性絲氨酸蛋白酶抑制劑規格：48T/96T 大鼠尾加壓素II(Urotensin II) ELISA試劑盒 96T/48T ELISA試劑盒 組裝/原裝
磺丁基-β-環糊精;磺丁基倍他環糊精鈉質量規格：>99%,USPCaptisol( beta-Cyclodextrin, sulfobutyl ethers, salts) 膜電位依賴性化線粒體氧化應激活性氧(ROS)初級熒光測定試劑盒20 人維生素H(VH)試劑盒 Human Vitamin H,VH ELISA Kit
纈氨霉素質量規格：>95% (HPLC),進分Valinomycin GM-CSFAb人粒細胞巨噬細胞集落刺激因子抗體規格：48T/96T 脂肪酸合成酶(FAS)測試盒 紫外分光光度法 25管/24樣
5-氯-1，3-二甲基吡唑 質量規格：>98%，5-Chloro-1,3-dimethyl-1H-pyrazole 小鼠BH3結構域凋亡誘導蛋白(Bid)ELISA試劑盒 ，英文名： Bid ELISA Kit RatProgesteronereceptor,PROGRELISA試劑盒小鼠孕同受體(PROGR)ELISA試劑盒規格：96T/48T
Bicine BufferHISTOCHOICEMOUNTINGMEDIA封組織學級無色至微黃液體RTsigma ELISAKitCO人皮質同/腎上腺同規格：48T/96T
6
環保在線