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目錄:上海帛科生物技術有限公司>>生化檢測試劑盒>>糖代謝系列>> N乙酰βD葡萄糖苷酶(NAG)測試盒微量法

N乙酰βD葡萄糖苷酶(NAG)測試盒微量法
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參考價 面議
具體成交價以合同協(xié)議為準
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更新時間:2023-12-25 17:52:45瀏覽次數(shù):532評價

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貨號 BK-01S6775
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商品介紹:

測定意義:

NAG是溶酶體中的一種酸性水解酶,廣泛存在于各種組織、體液和細胞中,以前列腺和腎近曲小管細胞內(nèi)含量最高。NAG活性變化與機體某些病理狀態(tài)密切相關。

測定原理:

NAG分解β-N-乙酰氨基葡萄糖苷生成對-硝基,后者在400nm有最大吸收峰,通過測定吸光值升高速率來計算NAG活性。

自備用品:

酶標儀/可見分光光度計、臺式離心機、水浴鍋、可調(diào)式移液器、96孔板/微量石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水。

提取液:液體 100 mL×1 瓶,4℃保存。

試劑一:液體 5 mL×1 瓶,4℃避光保存。

試劑二:液體 15 mL×1 瓶,4℃保存。

試劑三:液體 3 mL×1 瓶,4℃保存。

試劑四:液體 3 mL×1 瓶,4℃保存。

本試劑盒僅供研究使用公司實驗室提供免費代測,7個工作日出結果,提供原始數(shù)據(jù)!

產(chǎn)品名稱

規(guī)格

檢測方法

貨號

N乙酰βD葡萄糖苷酶(NAG)測試盒微量法

100管/48樣

微量法

BK-01S6775

11.png 

實驗結果判斷我有妙招:

1、定量測定結果根據(jù)標準曲線計算樣品中待測物的含量。

2、以樣品孔的OD值大于陰性對照OD值+2~3SD,作為陽性結果的閾值。

3、以P/N值(陽性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽性,P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑,P/N小于1.5為陰性。

4、ELISA試劑盒目測定性法:加入底物經(jīng)酶解和終止反應后,肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競爭法則淺于)陰性對照,與陰性對照的顏色接近者,判定為陰性。

與您分享常用不穩(wěn)定試劑的分類及要求:

① 易揮發(fā)、低燃點的試劑要密封,放于陰涼、通風、遠離火源處保存。

② 與水蒸氣,水發(fā)生反應的物質(zhì)要密封,并遠離水源保存。

③ 易與氧氣作用的試劑,應將其固體或晶體密封保存,不宜長期存放其水溶液,亞硫酸,氫硫酸溶液要密封存放,鉀,鈉,白磷更要采用液封形式。

④ 與二氧化碳反應的物質(zhì)要密封保存,其相應的溶液較固體更易反應,所以更要注意密封保存。

⑤ 易揮發(fā)或自身分解的試劑要密封,放于陰涼通風處保存。

操作步驟:

1. 樣品的準備:

a. 細胞樣品的準備:收集細胞,用4 ℃或冰浴預冷的PBS 或生理鹽水洗滌1-2遍。沉淀用預冷組織細胞裂解液4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見電動勻漿器) 。隨后勻漿液4℃離心,取上清作為待測樣品。

b. 組織樣品的準備:動物用生理鹽水(0.9% NaCl ,含有0.16mg/ml) 灌流清除血液后獲取組織樣品。按照每100mg加入500-1000ul組織細胞裂解液比例, 4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見電動勻漿器) 。隨后勻漿液4 ℃離心,取上清作為待測樣品。

d. 使用BCA蛋白濃度測定試劑盒(P1511)測定蛋白濃度。通常10-20ug蛋白的細胞或組織勻漿液樣品中SOD平均活力約1個活力單位左右(不同細胞和組織的差異會比較大,該活力范圍僅作為初步的參考) 。每種樣品準備20-100 ug蛋白量通常已經(jīng)足夠用于后續(xù)檢測。

e. 根據(jù)蛋白濃度和預計的蛋白使用量,用試劑盒提供的SOD檢測緩沖液適當稀釋樣品。例如,小鼠肝臟通常需要稀釋10-100 倍。準備好的樣品如果當天測定,可以冰浴保存;如果當天不能完成測定,可以-70 ℃凍存,但建議盡量當天完成測定。

2. 試劑盒的準備工作:

a. WST-8酶工作液的配制: 參照下表,根據(jù)待檢測樣品(包括標準品) 數(shù)量,配制適量WST-8酶工作液,配制好的WST-8酶工作液4 ℃或冰浴保存,可當天使用,但建議盡量現(xiàn)配現(xiàn)用。

注意:由于酶溶液的用量較少且易沉降,必須注意在使用前先輕輕離心一下,然后適當混勻后再使用。

b. 反應啟動工作液配制:將試劑盒提供的反應啟動液 (40X) 溶解后混勻,按1μl 反應啟動液(40X) 加入39μl SOD 檢測緩沖液的比例進行稀釋,即為反應啟動工作液。4℃或冰浴保存,可當天使用,但建議盡量現(xiàn)配現(xiàn)用。

c. (可選做) SOD 標準品準備:需自備SOD標準品,用本試劑盒提供的稀釋液將SOD標準品稀釋至如下系列濃度:20U/ml,10U/ml ,5U/ml,2.5U/ml,1.25U/ml,0.625U/ml。在隨后的檢測中可以各取20微升,參考樣品進行檢測。說明:為避免稀釋后SOD酶活性的下降, SOD標準品宜現(xiàn)稀釋現(xiàn)使用;本試劑盒對于SOD的檢測并不需要SOD作為標準品,但可以使用SOD標準品作為陽性對照或作為對SOD活性定量的參考。

10ku S1 核酸 Nuclease,S1   4℃保存

1000mL TAE,50X  TAE,50X  常溫保存

8次 細胞表面蛋白分離試劑盒 Bacterial Surface Protein Isolation Kit -20℃保存

2 ug pST1347-cas9-D10A pST1347-cas9-D10A 低溫運輸,-20℃保存

50次 一管式病毒DNAout One-Tube Viral DNAOUT 常溫

1瓶 CCC-HSM-2細胞株 CCC-HSM-2 低溫運輸和保存

蠟樣芽孢桿菌顯色培養(yǎng)基(第三代)  1000ml

100mg 多核苷酸化 Polynucleotide Phosphorylase -20℃保存

125mL Phosphate Buffered RIPA,2X Phosphate Buffered RIPA,2X 常溫保存

100mL 超級培養(yǎng)基 Super LB Medium 4℃保存,其中成分二-20℃保存,有效期一年。

 

2 ug pOTB7 PPP2R5D pOTB7 PPP2R5D 低溫運輸,-20℃保存

N乙酰βD葡萄糖苷酶(NAG)測試盒微量法Rabbit Anti-mouse IgG-Fc/PE-Cy7  PE-Cy7標記的兔抗小鼠IgG-Fc 規(guī)格: 0.1ml

KIAA1576/VAT1L  囊泡胺轉(zhuǎn)運蛋白1家族蛋白抗體 規(guī)格: 0.2ml

SEI2/SERTAD2  調(diào)控周期蛋白依賴蛋白激SEI2抗體 規(guī)格: 0.2ml

DDB2  DNA損傷結合蛋白2抗體 規(guī)格: 0.1ml

RBPJK/RBP-J  Notch轉(zhuǎn)錄調(diào)控蛋白RBPJK抗體 0.2ml

CRP  C-反應蛋白抗體 規(guī)格: 0.1ml

NXPH1  神經(jīng)外營養(yǎng)蛋白1抗體 規(guī)格: 0.2ml

CDK2  周期素依賴性激2抗體 規(guī)格: 0.1ml

TSPAN14  四分子交聯(lián)體14抗體(四旋蛋白) 規(guī)格: 0.2ml

P-cadherin  P-鈣粘附分子抗體 規(guī)格: 0.1ml

KIST/UHMK1  絲/蘇蛋白激KIST抗體(激相互作用與白相關基因) 規(guī)格: 0.2ml

CA III/Carbonic anhydrase 3  碳酸酐3抗體 規(guī)格: 0.2ml

 


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