酶聯(lián)免疫吸附測定 (ELISA) 是一種免疫學(xué)技術(shù)，用于檢測和測量特定蛋白質(zhì)，如生物樣品中的抗體、抗原和激素等。

如下圖所示：我們將從以下兩個方面對試劑盒進(jìn)行研究：

首先我們從ELISA試劑盒的產(chǎn)品組成去了解試劑盒：在科研實驗中一般采用試劑盒進(jìn)行測定。ELISA試劑中有三個必要的試劑：免疫吸附劑、結(jié)合物和酶的底物。詳情如下圖：

然后我們從ELISA試劑盒的性能方面去了解：

1、檢測范圍：

建立線性范圍：需測定9-11個濃度水平，每個濃度水平重復(fù)測定3-4次。

驗證標(biāo)稱線性參數(shù)：需測定4-6個濃度水平，每個濃度水平重復(fù)測定3-4次。

所有樣本應(yīng)在一次運行中或幾次間隔很短的運行中隨機(jī)測定，最好在一天之內(nèi)完成。

2、靈敏度：

示例：人 IL-13 的可檢測濃度為 0.1 pg/ml (6 次獨立實驗的平均值)。 10 個零標(biāo)準(zhǔn)品濃度 OD 的平均值加上兩倍 SD，計算可檢測濃度。

注意：靈敏度跟檢測范圍點不相等。

3、穩(wěn)定性（重復(fù)性、精密性）：

酶標(biāo)板內(nèi)精密度 3 個已知濃度的樣本酶標(biāo)板內(nèi)重復(fù)測定 20 次，評估酶標(biāo)板內(nèi)的精密度。酶標(biāo)板間精密度 3 個已知濃度的樣本酶標(biāo)板間重復(fù)檢測 6 次，評估酶標(biāo)板間的精密度。  試劑盒一般板內(nèi)變異系數(shù)小于10% ，板間變異系數(shù)小于15% （統(tǒng)計學(xué)概念）  所有樣本應(yīng)在一次運行中或幾次間隔很短的運行中隨機(jī)測定，最好在一天之內(nèi)完成。  批內(nèi)精密度：是眾多種類精密度中最基本的一個，它是在嚴(yán)格的相似條件下，所得到的最佳的精密度。  批間精密度：指在同一實驗室，由同一（組）操作員在同一儀器上，使用同一方法和同種、同一批號試劑，在一段時間內(nèi)(一般為一個月或20個工作日)對同一測試樣品（常用質(zhì)控品）測量結(jié)果的精密度。  我們的試劑盒控制板內(nèi)，批內(nèi)CV值在10%內(nèi)，批間CV值在15%內(nèi)。

4、準(zhǔn)確度（回收率）：

示例：5 份健康人血清中加入 3 個不同濃度水平的人 IL-13，未加人 IL-13 的血清作為本底，計算回收率。回收率的范圍從 82 %至 110 %，平均回收率為 98 %。

現(xiàn)在我們了解了產(chǎn)品的組成，那讓我們來看看實驗中所需要的儀器和設(shè)備吧！