RNAsafe 高效 RNase 滅活劑

保存條件：－20℃保存半年以上。
產(chǎn)品介紹：
RNAsafe 含有數(shù)種特殊化合物，可使 RNase 失活，高效去除各種溶液或者反應(yīng)緩沖液中可能存在的 RNase，從而防止 RNA 的降解。RNAsafe 可用于制備 RNA 懸浮液，并可加入到各種 RNA 的反應(yīng)液中（如體外轉(zhuǎn)錄、逆轉(zhuǎn)錄、RT-PCR、探針制備、分子雜交、Nuclease Protection Assay 等）。滅活可能存在的微量 Rnase 污染，保持 RNA 穩(wěn)定性，獲得更佳實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
產(chǎn)品特點(diǎn)：
1. 適合于各種緩沖液，包括不能由DEPC處理的Tris及MOPS緩沖液系統(tǒng)等。
2. 安全，方便地去除溶液中微量的RNase。
3. 處理過(guò)的溶液隨時(shí)可以再處理（60℃ 10-20 min），以去除任何可能發(fā)生的后續(xù)RNase污染。
4. 不影響逆轉(zhuǎn)錄酶、RNA聚合酶和耐熱DNA聚合酶的活性，可用于逆轉(zhuǎn)錄和體外轉(zhuǎn)錄反應(yīng)。
5. 處理后不需高壓滅菌。
使用方法：
1. 本品為 20×濃縮液，在待處理的一般溶液或反應(yīng)緩沖液中稀釋 20×RNAsafe 到終濃度為 1×的工作濃度。如：95μl 待處理溶液中可加 5μl RNAsafe。
2. 60℃處理 20 min 以使 RNase 失活。經(jīng) RNAsafe 處理后的溶液冷卻至室溫即可使用。處理過(guò)的溶液可再次處理（60℃ 10-20 min），以去除存儲(chǔ)過(guò)程中可能發(fā)生的 RNase 污染。溶液冷卻到室溫后再加入逆轉(zhuǎn)錄酶等對(duì)高溫敏感的酶制劑。

一、模板DNA：PCR反應(yīng)需要模板DNA，如從細(xì)胞、組織、血液中提取DNA等；

二、引物：PCR反應(yīng)的兩個(gè)引物，分別與模板DNA的兩端配對(duì)擴(kuò)增所需的特定區(qū)域，引物也可以合成為T(mén)A克隆等過(guò)程中使用到的引物；

三、dNTPs：PCR反應(yīng)中需要四種dNTPs，包括脫氧腺苷酸（dATP）、脫氧胸苷酸（dCTP）、脫氧鳥(niǎo)苷酸（dGTP）、脫氧胞嘧啶酸（dTTP），用于細(xì)胞分裂、DNA合成         等生物學(xué)過(guò)程，用于PCR擴(kuò)增的模板DNA鏈的延伸和擴(kuò)增；

四、Taq DNA聚合酶：PCR反應(yīng)需要的聚合酶，一般使用Taq聚合酶，還有一些其他種類的聚合酶如PFU、Phusion等，用于擴(kuò)增DNA鏈；

五、PCR buffer溶液：對(duì)PCR反應(yīng)具有緩沖作用，調(diào)節(jié)反應(yīng)pH，硫代硫酸氫鹽SDS、小分子有機(jī)化合物如甲醛，可增強(qiáng)PCR反應(yīng)特異性，從而提高反應(yīng)效率；

六、酶切體系：PCR擴(kuò)增往往涉及到重組、構(gòu)建和測(cè)序等等實(shí)驗(yàn)步驟，常常需要進(jìn)行酶切操作。

七、MARK:一種分子量標(biāo)準(zhǔn)，用來(lái)判別DNA片段大小的工具。

八、DNA純化試劑盒：用于純化PCR反應(yīng)產(chǎn)物；

①Oligo dT
選擇Oligo dT時(shí)，要求RNA必須有Poly A，所以真核生物的mRNA都適用。適合長(zhǎng)鏈甚至全長(zhǎng)mRNA的RT，對(duì)RNA樣品的質(zhì)量要求較高，不要有明顯的DNA污染、RNA降解和RNA斷裂。假如想探索新的mRNA進(jìn)行RT反應(yīng)，建議推薦使用Oligo dT引物。使用Oligo dT引物要比隨機(jī)引物和特異性引物的穩(wěn)定性要好。
②隨機(jī)引物
適合各種RNA的RT，尤其適合模板豐度很低的情況（比如某個(gè)gene表達(dá)量很低）。選擇隨機(jī)引物時(shí)，鏈cDNA合成反應(yīng)中就是以所有的RNA為模板，然后進(jìn)行PCR反應(yīng)時(shí)設(shè)計(jì)引物進(jìn)行特異性擴(kuò)增。同時(shí)要注意隨機(jī)引物的量和總RNA量之間的關(guān)系，一般建議每5µg總RNA的隨機(jī)引物的用量為50ng，如果每5µg總RNA的隨機(jī)引物的用量超過(guò)250ng，可能會(huì)導(dǎo)致小片段產(chǎn)物（＜500bp）的增加和長(zhǎng)片段、全長(zhǎng)產(chǎn)物的降低。
③特異性引物
基因特異性引物（GSP）是某個(gè)基因序列的一部分，與模板互補(bǔ)的引物。該引物需要結(jié)合目標(biāo)RNA的已知序列進(jìn)行設(shè)計(jì)。由于引物和RNA序列特異性結(jié)合，每個(gè)目標(biāo)RNA都需要一套新的基因特異性引物。因此，當(dāng)分析多種目標(biāo)時(shí)，則需要適用更多的RNA樣本。而且不同引物退火溫度本來(lái)就不相同，所以一般不推薦使用。如需要使用特異性引物，建議對(duì)退火溫度進(jìn)行優(yōu)化。