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大鼠胎兒表皮組織提取物【Embryo: Normal Rat Fetal Epidermal Derivatives】
表皮組織是由胚胎時期外胚層形成,具有抗摩擦和抗損傷的作用。公司科技提供來自新鮮或冷凍大鼠胎兒表皮組織中高質量的總RNA,PCR準備的條cDNA鏈,蛋白質及其亞組分。所有的產品在發貨之前均經過嚴格的QA/QC流程以確保其質量。這些產品可以直接用于基因克隆,表達圖譜分析以及各種分子生物學實驗的研究。
總RNA制備:利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA,然后用Qiagen RNA Clean Kit進行純化。公司提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結果等。
cDNA制備:純化后的總RNA來合成cDNA鏈,以50ul總反應體系進行逆轉錄,體系中包括MMLV反轉錄酶和隨機引物以及10mg總RNA。68℃反應10min 后終止RT反應。利用1x RT Buffer 運輸cDNA,1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應。所有cDNA產品在訂單發貨之前都經過了嚴格的QA/QC分析,保證了產品的質量。
蛋白制備:利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備大鼠胎兒表皮組織裂解液,離心去除組織碎片,通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度,組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF,-80度保存。
潛在的應用: <1>已知基因的PCR克隆;<2>mRNA選擇性剪接;<3>基因克隆與目標測序;<4> Western and Northern Blot;<5>蛋白檢測與蛋白質組學;<6>芯片研究與表達圖譜。
產品名稱 | 大鼠胎兒表皮組織提取物 |
規格 | 詳見說明書 |
貨號 | XG-X7090 |
培養步驟:
對于貼壁細胞,傳代可參考以下方法:
1. 棄去培養上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養瓶中,置于37℃培養箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察Ⅱ型肺泡上皮細胞|細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養瓶后加少量培養基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補加培養基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養液后吹勻。
4. 將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
方法二:可選擇半數換液方式,棄去半數培養基后,將剩余細胞懸起,將細胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
注意事項:
1. 接收到細胞,肉眼觀察細胞培養基顏色,顯微鏡觀察細胞生長情況,并對細胞進行不同倍數拍照(建議收到時的培養瓶拍一張照片,顯微鏡拍收到時的細胞100X,200X各一張)。
2.用75%的酒精消毒(建議配置75%的酒精的水是滅菌過的)。
3.嚴格無菌操作,打開細胞培養瓶。
4.將細胞培養瓶內的培養基用吸管*吸出(嚴禁直接傾倒),放入另一無菌容器中(建議換新的培養基培養細胞)。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細胞表面,洗3-4次遍,加入0.05%-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細胞變圓,輕輕拍打培養瓶直到細胞脫落,加入終止液終止。
6.1000rpm,5min離心,重懸細胞。
7.換新的細胞培養瓶,37℃,5%CO2培養。
操作要點:
1)將培養基在37℃水浴鍋預熱;準備一個15mL無菌的離心管,加入8mL預熱培養基。
2)將凍存細胞從液氮罐中取出,快速放入37℃水浴鍋中復溫(可準備一潔凈的燒杯,裝滿37℃的水,細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內,再逐步轉移到水浴鍋中)。輕輕晃動凍存管,使細胞能在1~2min內*解凍,使細胞能盡快通過易受損的溫度段(-5~0℃)。注意凍存管管口不能沒入水中,BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。
3)用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內,將管內細胞轉移至準備好的離心管內,輕輕吹打液體,使細胞均勻分散,降低DMSO濃度,吹打時避免產生氣泡。用新鮮培養基洗管壁2次,均轉移至離心管內。
4)800rpm離心5min,棄上清,加入新鮮的培養基,吹打制成細胞懸液。
5)將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內,補加適量的培養基,輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻,放入溫箱內培養。
6)第二天觀察細胞貼壁生長情況,換新鮮培養基以去除死細胞。繼續培養,待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經過2~3次傳代,細胞活力恢復后才能進行后續的實驗。
Human IL-22 (Interleukin 22) ELISA KitB細胞白血病/淋巴瘤蛋白7抗體anti- OCT4 antibody血管內皮生長因子A(VEGFA)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法)
Human IL-23 (Interleukin 23) ELISA Kit白細胞抗原B相關轉錄蛋白5抗體anti- Oct6-Specific antibody叉頭框蛋白M1(FOXM1)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法)
Human IFN-γ (Interferon Gamma) ELISA KitBTB/POZ結構域蛋白1(型肝炎病的NS5A反轉錄蛋白8)抗體anti- OCTN2 antibody神經調節素1(NRG1)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法)
Human TNF-α (Tumor Necrosis Factor Alpha) ELISA KitBCL7B蛋白抗體anti- ODAM antibody神經調節素1(NRG1)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法)
Human TGF-β1 (Transforming Growth Factor Beta 1) ELISA Kit 性核蛋白2(鋅指蛋白basonuclin2)抗體anti- ODC1 antibody膜聯蛋白A2(ANXA2)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法)
Human VEGF-A (Vascular Endothelial Cell Growth Factor A ) ELISA Kit Bcl2 alpha蛋白抗體anti- ODC1 antibody表皮調節素(EREG)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法)
Human EREG (Epiregulin) ELISA KitB細胞轉錄激活因子抗體anti- ODF1 antibody神經纖維素2(NF2)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法)
Human LEP (Leptin) ELISA Kit腦鈉通道蛋白1抗體anti- ODF2 antibody心型脂肪酸結合蛋白(FABP3)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法)
大鼠胎兒表皮組織提取物Hieff Clone™ Multi One Step Pcr Cloning Kit多片段一步法(快速/無縫)克隆試劑盒原鈣粘附蛋白18抗體Human GZMM(Granzyme M) ELISA Kit髓鞘相關糖蛋白抗體試劑盒
Hieff Clone™One Step Pcr Cloning Kit一步法(快速/無縫)克隆試劑盒原鈣粘附蛋白20抗體Human NQO1(NAD(P)H dehydrogenase [quinone] 1) ELISA Kit髓鞘相關糖蛋白試劑盒
Hieff Mut™ Multi Site-Directed Mutagenesis Kit多點突變試劑盒原鈣粘附蛋白8抗體Human NR1I3(Nuclear receptor subfamily 1 group I member 3) ELISA Kit髓鞘性蛋白抗體試劑盒
XYLENE CYANOLE F.F 二苯青、C.I. 42135; Acid blue 147原鈣粘附蛋白α1抗體Human CRHBP(Corticotropin-releasing factor-binding protein) ELISA Kit髓鞘蛋白P0試劑盒
VITAMIN B12 鈷胺素、Cyanocobalamin原鈣粘附蛋白α3抗體Human APOM(Apolipoprotein M) ELISA Kit髓脂性蛋白試劑盒
Uridine 5′-triphosphate trisodium salt hydrate (UTP)、尿苷-5-三酸三鈉鹽原鈣粘附蛋白α4抗體Human APOD(Apolipoprotein D) ELISA Kit髓脂P2蛋白試劑盒
SPERMIDINE 亞精胺原鈣粘附蛋白α5抗體Human CXCR4(C-X-C chemokine receptor type 4) ELISA Kit髓過物酶特異性抗中性粒細胞胞質抗體IgG試劑盒
RETINOIC ACID、、 Vitamin A Acid、Tretinoin; Aberel; Airol; Aknoten; Cordes Vas; Dermairol; Retin-A; Vesnaroid原鈣粘附蛋白α9抗體Human AMY2(Amylase Alpha 2, Pancreatic) ELISA Kit髓過物酶試劑盒
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