收到細胞如何處理？

1、首先，觀察細胞培養瓶是否完好，培養液是否有漏液、渾濁等現象。若有，請拍照，（所拍照片將作為后續服務依據）。
2、用75%酒精擦拭細胞培養瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態。因運輸問題，部分貼壁細胞會有少量從瓶壁脫落；先不要打開培養瓶蓋，將細胞置于細胞培養箱內靜置培養2-4小時，以便穩定細胞狀態。
3、仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關信息，如貼壁特性（貼壁/懸浮）、細胞形態、所用基礎培養基、血清比例、所需細胞因子、傳代比例、換液頻率等。
4、靜置完成后，取出細胞培養瓶，鏡檢、拍照，記錄細胞狀態（所拍照片將作為后續服務依據）；建議細胞傳代培養后，定期拍照、記錄細胞生長狀態。
5、貼壁細胞：若細胞生長密度超過80%，可正常傳代；若未超過80%，移除細胞培養瓶內培養基，預留5ml左右繼續培養，直至細胞密度達80%左右再進行傳代操作，瓶蓋可稍微擰松。
6、懸浮細胞：將細胞培養瓶內液體全部轉移至50ml無菌離心管內，1200rpm離心5min，離心后上清培養基可收集備用，管底細胞沉淀加入5ml培養基吹打、重懸。鏡檢時，若細胞密度超過80%，可將細胞懸液分至2個細胞培養瓶內培養，補加培養基至5ml；若細胞密度未超過80%，將細胞懸液移至原瓶繼續培養，直至細胞密度達80%左右時再進行傳代操作。

      描述：(1)公司可提供新鮮或凍存細胞株；(2)細胞株數量約 5×105/瓶；(3)不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌。

      發貨：客戶可根據自身科研項目的需要選擇不同類型的細胞培養瓶和相應的細胞密度。發貨的新鮮細胞還包含:1、發貨的T25方瓶中裝滿50ml左右*培養基；2、說明書及注意事項；3、公司售后服務標準。

      保存和應用：客戶可以根據自己的需求選擇新鮮或者凍存的原代細胞，如是新鮮細胞株，客戶收到細胞后應立即將其放入CO2細胞培養箱內靜置后2-3h，再進行后續的實驗操作。如是凍存細胞，客戶收到細胞后應立即將其放入液氮、-80℃冰箱或立即進行復蘇。該細胞只可用于科研，不得用于臨床應用。
總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進行純化。公司提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結果等。

cDNA制備：純化后的總RNA來合成cDNA一鏈，以50ul總反應體系進行逆轉錄，體系中包括MMLV反轉錄酶和隨機引物以及10mg總RNA。68℃反應10min 后終止RT反應。利用1x RT Buffer 運輸cDNA，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應。所有cDNA產品在訂單發貨之前都經過了嚴格的QA/QC分析，保證了產品的質量。

蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備組織裂解液，離心去除組織碎片，通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。

潛在的應用： <1>已知基因的PCR克隆；<2>mRNA選擇性剪接；<3>基因克隆與目標測序；<4> Western and Northern Blot；<5>蛋白檢測與蛋白質組學；<6>芯片研究與表達圖譜。

細胞培養步驟：

一．培養基及培養凍存條件準備：
1） 準備DMEM-H培養基(GIBCO,貨號1199500bt，添加NaHCO3 1.5g/L)，90%；胎牛血清，10%。也可根據實驗需要選擇懸浮培養基，使293T細胞懸浮生長。
2） 培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養箱濕度為70%-80%。
3） 凍存液：90%*培養基，10%DMSO，現用現配。液氮儲存。
二． 細胞處理：
1） 復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜（或將細胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養基，培養過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。
2） 細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。
對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1. 棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養瓶中，置于37℃培養箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加少量培養基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補加培養基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻。
4. 將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態良好時，可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時，棄去培養基后加入少量，細胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進行凍存。
冷凍保存細胞之方法？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase儲存。*-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大，造成細胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。

L-Valine非無菌藥品中大腸埃希菌（陽性）anti- ACAA1 antibody人白介素16(IL-16)ELISA試劑盒

L-Tryptophan;L-β-3-Indolyl alanine;(S)-2-AMino-3-(3-indolyl)propionic acid;(S)-(-)-Tryptophan;Trp化妝品中霉菌和酵母菌計數anti- ACAA2 antibody人白介素13(IL-13)ELISA試劑盒

DiMethyl Malonate;Methyl Malonate;Propanedioic acid diMethylester化妝品中菌落總數anti- ACAD10 antibody人白介素12(IL-12/P70)ELISA試劑盒

4-Methylpiperidine;4-Pipecoline; γ-Pipecoline;礦泉水中大腸菌群anti- ACAD8 antibody人白介素12(IL-12/P40)ELISA試劑盒

Diphenylmethane生活飲用水中總大腸菌群anti- ACAD9 antibody人白介素11(IL-11)ELISA試劑盒

SODIUM CHLORIDE生活飲用水中菌落總數anti- ACADL antibody人白介素10(IL-10)ELISA試劑盒

1-Methylnaphthalene生活飲用水中大腸埃希氏菌anti- ACADL-Specific antibody人胰島素樣生長因子結合蛋白4(IGFBP-4)ELISA試劑盒

1,4-Butanediol diglycidyl ether;凍干粉中腸道侵襲性大腸埃希氏菌（陽性）anti- ACADM antibody人胰島素樣生長因子2(IGF-2)ELISA試劑盒

H9C2大鼠心肌細胞Human PRELP (Proline Arginine Rich End Leucine Rich Repeat Protein) ELISA Kit1號染色體開放閱讀框135抗體anti- PC6 antibody乳過物酶(LPO)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法)

Human APSA (Anti-Phosphatidyl Serine Antibody) ELISA Kit1號染色體開放閱讀框141抗體anti- P-cadherin antibodyγ-谷氨酰轉移酶1(γGT1)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法)

Human APA (Anti-Phospholipid Antibody) ELISA Kit1號染色體開放閱讀框144抗體anti- PCAF antibody基質金屬蛋白酶13(MMP13)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法)

Human Anti-AlaRS (Anti-Alanyl-tRNA Synthetase/Anti-PL12-Antibody) ELISA Kit1號染色體開放閱讀框146抗體anti- PCBD1 antibody蛋白C(PROC)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法)

Human TARS (Threonyl tRNA Synthetase, cytoplasmic) ELISA Kit1號染色體開放閱讀框150抗體anti- PCBD2 antibody肝素結合性表皮生長因子(HBEGF)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法)

Human GTF2A1 (General Transcription Factor IIA, Polypeptide 1) ELISA Kit1號染色體開放閱讀框156抗體anti- PCBP2 antibody性成纖維細胞生長因子(FGF2)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法)

Human GUCA2A (Guanylate Cyclase Activator 2A) ELISA Kit1號染色體開放閱讀框159抗體anti- PCCA antibody3(KLK3)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法)

Human INSL3 (Insulin Like Protein 3) ELISA Kit1號染色體開放閱讀框162抗體anti- PCCB antibody骨保護素(OPG)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法)

公司產品采用干冰運輸，經過逐步的降溫，冷藏在-196℃度的液氮罐中，暫時停止其生命活動，保存其活性，使您的實驗更生動,公司代理品牌有：ATCC、sciencell、ICLC、GIBCO、IST-Banca等品牌.

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