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產品名稱:偽牛痘病毒探針法熒光定量PCR試劑盒
英文名稱:Pseudocowpox Virus(PCPV)
貨號:XG01P4008
分類:熒光定量PCR試劑盒
儲存條件:-20℃避光保存,避免反復凍融。
運輸:低溫、避光,快遞免費送貨上門。
實時定量PCR:
①β-actin陽性模板的標準梯度制備 陽性模板的濃度為1011,反應前取3μl按10倍稀釋(加水27μl并充分混勻)為1010,依次稀釋至109、108、107、106、105、104,以備用。
②反應體系如下:
標準品反應體系
序號 反應物 劑量
1 SYBR Green 1 染料 10μl
2 陽性模板上游引物F 0.5μl
3 陽性模板下游引物R 0.5μl
4 dNTP 0.5μl
5 Taq酶 1μl
6 陽性模板DNA 5μl
7 ddH2O 32.5μl
8 總體積 50μl
輕彈管底將溶液混合,6000rpm短暫離心。
基因反應體系:
序號 反應物 劑量
1 SYBR Green 1 染料 10μl
2 內參照上游引物F 0.5μl
3 內參照下游引物R 0.5μl
4 dNTP 0.5μl
5 Taq酶 1μl
6 待測樣品cDNA 5μl
7 ddH2O 32.5μl
8 總體積 50μl
輕彈管底將溶液混合,6000rpm短暫離心。
③制備好的陽性標準品和檢測樣本同時上機,反應條件為:93℃ 2分鐘,然后93℃ 1分鐘,55℃ 2分鐘,共40個循環。
PCR特異性:
1.primers design
這是重要的一步。理想的,只同目的序列兩側的單一序列而非其它序列退火的primer要符合下面一些條件:
1)足夠長,18~24bp,以保證特異性,當然,不是說越長越好,太長的primer同樣會降低特異性,并且降低產量;
2)GC%,40%~60%;
3)5'端和中間序列要多GC,以增加穩定性;
4)避免3'端GCrich,個BASE不要有GC,或者5個有3個不要是GC。
5)避免3'端的互補,否則,容易造成DIMER;
6)避免3'端的錯配;
7)避免內部形成二級結構;
8)附加序列(RT site,Promoter sequence)加到5'端,在算Tm值時不算,但在檢測互補和二級結構要加上它們;
9)使用兼并primer時,要參考密碼子使用表,注意:生物偏好性,不要在3'端使用兼并primer,并使用較高的primer濃度(1μM~3μM);
10)學會使用一種design software,PP5,Oligo6,DNA star,Vector NTI,Online design et al。
NZCYM瓊脂/NZCYM AgarBR100克國產/進口
*/脫氫膽酸/3,7,12-三氧-5β-膽烷酸/Dehydrocholic acidBR,98.5%10/100/500克國產/進口
全胃蛋白胨BR250克國產/進口
肉浸液瓊脂/Meat Infusion Agar一般細菌培養250克國產/進口
酸菌液體培養基/Lactobacillus Fluid Medium250克國產/進口
糖-明膠培養基/Lactose-Gelatin Medium產氣莢膜梭菌明膠液化試驗250克國產/進口
三糖鐵瓊脂培養基/三糖鐵培養基/TSI瓊脂/Triple Sugar Iron Agar腸桿菌科細菌的生化試驗250克國產/進口
沙門氏志賀氏屬瓊脂培養基/SS瓊脂/Salmonella Shigella Agar沙門氏菌屬和志賀氏菌屬的分離培養250克國產/進口
*麥康凱瓊脂基礎/*麥康克瓊脂基礎/SMAC大腸桿菌O157:H7的選擇性分離培養250克國產/進口
液體硫乙醇酸鹽培養基(不含瓊脂)/需氣菌厭氣菌培養基/Thioglycollate Medium(Without Agar)用于產氣莢膜梭菌確證試驗的細菌培養(GB、SN標準)250克國產/進口
高分化鼻咽細胞英文名稱:CNE-1
CCRF-CEM(人急性淋巴白血病細胞)5×106cells/瓶×2
甲狀旁腺激素(PTH)重組蛋白英文名稱:Recombinant Parathyroid Hormone (PTH)
偽牛痘病毒探針法熒光定量PCR試劑盒小鼠小腸血管內皮細胞*培養00mL 2006
戊*標準品 CAS: 2152445 Betamethasone Valerate 進口、國產 200mg
TET2英文名稱:RAP2BEphrin B抗體
雙瞇標準品 CAS: 33089611 Amitraz 進口、國產 200mg
戊*相關物質A標準品 CAS: 2240280 進口、國產 50mg
10309372Exonuclease I4000 units豬血管生成素2(ANG2)免疫試劑盒
*標準品 CAS: 549188 Amitriptyline 進口、國產 200mg
倍他爾標準品 CAS: 63659198 Betaxolol 進口、國產 200mg
53947925Exonuclease I20000 units豬血管生成素1(ANG1)免疫試劑盒
熒光定量PCR實驗步驟:
①取凍存已裂解的細胞,室溫放置5分鐘使其*溶解。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的lvfang,蓋緊管蓋。手動劇烈振蕩管體15秒后,15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚lvfang相,中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時加入的TRIZOL試劑的60%。
③RNA沉淀 將水相上層轉移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA,混勻后15到30℃孵育10分鐘后,于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液,每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),清洗RNA沉淀。混勻后,4℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時,先加入無RNA酶的水40μl用槍反復吹打幾次,使其*溶解,獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法測定先用稀釋用的TE溶液將分光光度計調零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后,讀取其在分光光度計260nm和280nm處的吸收值,測定RNA溶液 濃度和純度。
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