細胞凍存和復蘇是細胞培養技術里面容易出問題的部分，因此必須注意以下幾點：
 

　　1. 注意無菌操作。
 

　　2. 取細胞的過程中可能會接觸液氮，一定注意帶好防凍手套，護目鏡。
 

　　此項尤為重要，如果凍存管密封不嚴，細胞凍存管可能漏入液氮，解凍時，在水浴中搖晃，凍存管中的氣溫急劇上升，可導致爆炸，所以，一定要戴保護眼鏡和手套，復蘇過程中應蓋上恒溫水浴鍋的蓋。
 

　　3. 應在1-2min內使凍存液*融化。如果復溫速度太慢，則會造成細胞損傷。另外，細胞復蘇后的操作Hao在4℃冰浴中進行，以減少冷凍保護劑對細胞的毒性。
 

　　4. 復蘇過程中，升溫的速率要大，把從液氮取出的細胞在短的時間內放入水浴鍋。
 

　　5. 離心前須加入少量培養液。細胞解凍后二甲基亞砜濃度較高，注意加入少量培養液可稀釋其濃度，以減少對細胞的損傷。
 

　　細胞貼壁少的問題：教科書中說明凍存細胞解凍時1ml細胞液要加10ml-15ml培養液，經驗總結，培養基越少細胞越容易貼附。
 

　　復蘇細胞分裝的問題：復蘇1管細胞一般根據情況可分裝到1-2只培養瓶中，分裝過多，細胞濃度過低，不利于細胞的貼壁。
 

　　加培養基的量放入問題：這個量的多少的把握主要涉及到的問題是DMSO的濃度，從如果加培養基的太少，DMSO的濃度就會比較大，就會影響細胞生長，從以前的資料來看，DMSO的濃度在小于0.5%的時候對一般細胞沒有什么影響。還有一個說法是1%。所以如果凍存液的濃度是10%DMSO，那么加10ml以上的培養基就恰好稀釋到了無害濃度。