用酶或機械方法直接從人或動物組織中分離出來的細胞。嚴格來說，從機體分離出來到傳代之前的細胞稱為原代細胞，絕大部分的原代細胞在體外可以分裂10-15次(這與細胞的端粒長短有關)，再加上取材，成本等因素，通常會把培養(yǎng)的第一代到第十代以內的細胞統(tǒng)稱為原代細胞。
原代細胞可用來轉染siRNA、antisense RNA、microRNA 等 200bp 以內的小分子 RNA 和 DNA，可轉染絕大多數(shù)原代細胞。目前，無論國外還是國內，原代細胞的核酸轉染都是個熱點難題，市場還缺乏真正有效的商品化的原代細胞核酸轉染試劑。原代細胞能夠高效轉染絕大多數(shù)原代細胞，獲得比較理想的基因敲除效果。甚至對一些活體寄生蟲幼蟲，也能獲得較為理想的轉染結果。對于大多數(shù)原代細胞，RFect PM 細胞轉染陽性率都在80%以上，而轉染細胞死亡率不到 10%。
原代細胞分離和培養(yǎng)基本步驟：
1、器官和組織的選擇
盡可能的去除不必要的組織和血跡。
2、原代細胞的分離
(1)應用PriCells原代細胞分離試劑盒I、II、III。
(2)根據(jù)組織來源不同，可選用不同的PriCells原代細胞分離試劑盒。
3、原代細胞的培養(yǎng)：
(1)PriCells原代細胞特制培養(yǎng)基
(2)PriCells原代細胞特制添加物
(3)優(yōu)質胎牛血清
4、細胞的培養(yǎng)和鑒定：
PriCells原代細胞鑒定試劑盒
5、原代細胞的傳代、保存
(1)傳代：依椐細胞的生長狀態(tài)，生長的細胞1：2或1：3進行傳代。
(2)保存：DMSO+培養(yǎng)液+血清
按下列順序降溫：室溫→4℃(20分鐘)→冰箱冷凍室(30分鐘)→超低溫冰箱(-80℃過夜)→液氮。
6、原代細胞的復蘇
(1)取出細胞，迅速放入37℃溫水中快速解凍。
(2)吸出細胞懸液，并加10倍以上培養(yǎng)液。
(3)用培養(yǎng)液適當稀釋后接種培養(yǎng)瓶，放入37℃CO2培養(yǎng)箱靜置培養(yǎng)。
