ClearColi K12 電擊感受態細胞只能用于電擊轉化，不能用于熱激轉化。ClearColi K12菌株來源于K12endA-recA-菌株。在K12 endA-recA-菌株中引入突變，導致ClearColi K12細胞壁外層的脂多糖(LPS)被修飾:LPS的低聚糖鏈被刪除，同時LPS的兩個?；溡脖粍h除，進而破壞了ClearColi K12大腸桿菌的內毒素信號通路，使得從該細胞中提取的蛋白或質粒DNA中的內毒素含量極低，提取的無內毒素質粒廣泛應用于后續的哺乳動物細胞轉化。ClearColiK12同時缺失核酸內切酶(endA)和重組酶(recA)，提高了質粒DNA的產量和質量。ClearColiK12電擊感受態細胞經特殊工藝制作，pUC19質粒檢測轉化效率可達1X10cfu/μg DNA?；蛐蜑? FλΔendAΔ recAfrr181 msbA52Δ gutQΔ kdsDΔ lpxL Δ lpxMΔpagPlpxP A eptA

操作方法:1.0.1cm 電擊杯和杯蓋從儲存液中拿出倒置于干凈的吸水紙上5min,待其瀝干水分,正置5min,使乙醇充分揮發,待乙醇揮發干凈立即插入冰中,壓實冰面,電極杯頂離冰面0.5cm以方便蓋上杯蓋,冰中靜置5min充分降溫。2.取 -70℃保存的電擊感受態細胞插入冰中5min,待其融化,加入目的DNA(質?；蜻B接產物)并用手boda離心管底輕輕混勻,避免產生氣泡,立即插入冰中。A.測定轉化效率使用1μl 0.1ng/μl 的對照質粒pUC19;B.對于連接產物,請用乙醇沉淀DNA后加入適量TE緩沖液(10mM Tris-HCl,pH7.5;1mM

EDTA)重懸,DNA濃度不超過100ng/μl,體積不超過5μl/50μl感受態。3.用 200μl 槍頭將感受態-DNA混合物快速移到電擊杯中,避免產生氣泡,蓋上杯蓋。4.啟動電轉儀,設置參數:C=25μF, PC=200Ω,V=1.8kV(BioRad電轉儀推薦參數);或C=25μF,PC=200Ω.V=2.4kV(BTX ECM 630或Bio-Rad GenePulser電轉儀推薦參數);也可按所用電轉儀推

薦的參數操作。將電擊杯快速放入電轉槽中,電擊完成快速插入冰中。5.2min后從冰中取出電擊杯,放室溫,加入700μl不含抗生素的無菌S.O.C.培養基(室溫),用1ml

槍吹吸電擊杯底部數次混勻后,轉移到50ml離心管(BD Falcon50ml 錐形離心管等),向離心管中補加S.O.C.培養基至5ml。37C,225rpm復蘇60min。