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檸檬酸合酶(CS)檢測試劑盒

參   考   價: ¥ 2760

訂  貨  量: ≥1支

具體成交價以合同協議為準

產品型號:SH0090

品       牌:其他品牌

廠商性質:生產商

所  在  地:南京市

更新時間:2024-03-05 15:10:30瀏覽次數:143

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CAS SH0090 產品規格 50T/24S
級別 超純、高純
CS(EC 2.3.3.1)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養細胞的線粒體基質中,是三羧酸循環第一個限速酶,是三羧酸循環主要調控位點之一。

貨號

名稱

規格

SH0090

檸檬酸合酶(CS)檢測試劑盒(分光光度50T/24S)

50T/24S

SH0091

檸檬酸合酶(CS)檢測試劑盒(分光光度25T/12S)

25T/12S

 

 

 

正式測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定                                             

測定意義:

CSEC 2.3.3.1)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養細胞的線粒體基質中,是三羧酸循環第一個限速酶,是三羧酸循環主要調控位點之一。

測定原理:

CS催化乙酰CoA和草酰乙酸產生檸檬酰fumei a,進一步水解產生檸檬酸;該反應促使無色的DTNB轉變成黃色的TNB,在 412nm處有特征吸光值。

組成:

產品名稱

SH0091-25T/12S

SH0090-50T/24S

Storage

試劑一:液體

25ml

50ml

-20℃

試劑二:液體

5ml

10ml

-20

試劑三:液體

0.5ml

1ml

-20

試劑液體

28ml

55ml

4℃

試劑五:粉劑

1

1

4℃

試劑:粉劑

1

1

-20

說明書

一份

SH0091-25T/12S試劑六:粉劑×1支,-20℃保存,臨用前加入1.2ml蒸餾水,用不完的試劑仍-20℃保存;

SH0090-50T/24S試劑六:粉劑×1支,-20℃保存,臨用前加入2.4ml蒸餾水,用不完的試劑仍-20℃保存;

自備儀器和用品:

可見分光光度計、臺式離心機、水浴鍋、可調式移液器、1ml玻璃比色皿、研缽、冰、無水乙醇和蒸餾水

樣本的前處理

組織、細菌或細胞中胞漿蛋白與線粒體蛋白的分離:

① 稱取約0.1g組織或收集500萬細胞,加入1ml試劑一和10μl 試劑三,用冰浴勻漿器或研缽勻漿。

② 將勻漿600g4℃離心5min

③ 棄沉淀,將上清液移至另一離心管中,11000g4℃離心10min

④ 上清液即胞漿提取物,可用于測定從線粒體泄漏的CS(此步可選做)。

⑤ 在步驟的沉淀中加入200μl試劑二和2μl 試劑三,超聲波破碎(冰浴,功率20%或200W,超聲3秒,間隔10秒,重復30次),用于線粒體CS測定。

測定步驟

1、分光光度計或酶標儀預熱30min以上,調節波長至412nm,蒸餾水調零。

2、樣本測定

1)在試劑五中加入0.6ml無水乙醇和13ml試劑四,混勻,37℃(哺乳動物)或25℃(其它物種)孵育5min用不完的試劑分裝后-20℃保存,禁止反復凍融;

2測定管:在EP管中加入40μl樣本、880μl試劑五40μl試劑六,混勻,37℃反應15min后立即測定吸光值A1

3對照管:在EP管中加入40μl樣本、880μl試劑四40μl試劑六,混勻,37℃反應15min后立即測定吸光值A2

4計算ΔA=A1-A2,每個測定管設一個對照管。

CS活性計算

1)按樣本蛋白濃度計算:

單位的定義:每mg組織蛋白每分鐘催化產生1 nmol TNB定義為一個酶活力單位。

CSnmol/min /mg prot)=[ΔA×V反總÷ε×d×109]÷(V×Cpr) ÷T=117.6×ΔA÷Cpr

此法需要自行測定樣本蛋白質濃度。

2)按樣本鮮重計算:

單位的定義:每g組織每分鐘催化產生1 nmol TNB定義為一個酶活力單位。

CSnmol/min /g 鮮重)=[ΔA×V反總÷ε×d×109W× V÷V樣總)÷T=23.8×ΔA÷W

3)按細菌或細胞密度計算:

單位的定義:每1萬個細菌或細胞每分鐘催化產生1 nmol TNB定義為一個酶活力單位。

CSnmol/min /104 cell=[ΔA×V反總÷ε×d×109500×V÷V樣總)÷T=0.0475×ΔA

V反總:反應體系總體積,9.6×10-4 LεTNB摩爾消光系數,1.36×104 L / mol /cmd:比色皿光徑,1cmV樣:加入樣本體積,0.04 mlV樣總:加入提取液體積,0.202 mlT:反應時間,15 minCpr:樣本蛋白質濃度,mg/mlW:樣本質量,g500:細胞或細菌總數,500萬。


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