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產(chǎn)品描述
LbCas12a (又名Cpf1)核酸酶來源于Lachnospiraceae bacterium ND2006菌株。LbCas12a是由crRNA介導(dǎo)的DNA核酸內(nèi)切酶，在靶標(biāo)雙鏈DNA存在PAM (TTN) 序列的情況下，特異地剪切靶標(biāo)雙鏈DNA，使DNA雙鏈斷裂并生成粘性末端。而LbCas12a特異地剪切單鏈DNA靶標(biāo)不依賴PAM序列。此外，雙鏈或單鏈DNA靶標(biāo)均能激活LbCas12a的反式剪切活性(即旁路剪切活性/附屬剪切活性)，即當(dāng)LbCas12a酶與crRNA、靶標(biāo)DNA結(jié)合形成三元復(fù)合物后，便會被激活針對非特異序列ssDNA的反式剪切活性，將體系中的任意序列ssDNA切碎。因此，LbCas12a酶不僅可用于體外dsDNA的特異剪切，也可用于靶標(biāo)核酸的快速檢測，詳見本公司開發(fā)的HOLMES[1]核酸快檢技術(shù)。
本產(chǎn)品將無甘油LbCas12a核酸酶凍干，可用于常溫運輸及保存，使用配套的凍干Cas酶復(fù)溶液復(fù)溶后，具有與本公司非凍干型LbCas12a (Cpf1) Nuclease（#32108）同等的反應(yīng)活性。本產(chǎn)品包括可用于單個反應(yīng)的酶凍干粉及凍干球等多種凍干形態(tài)，滿足不同下游反應(yīng)體系構(gòu)建的需求。
產(chǎn)品組分
組分 | V32108E-01 | V32108E-02 |
| ● LbCas12a Lyophilized Powder (SCREW CAP TUBES) | 100 μg | 100 μg × 5 |
| ● LbCas12a Reconstitution Buffer | 200 μL | 1 mL |
◆ 建議使用 136 μL 復(fù)溶液復(fù)溶一管 100 μg 的 LbCas12a 凍干粉，復(fù)溶后酶濃度為 5 μM，即 5 pmol/μL。
保存條件
本產(chǎn)品常溫保存及運輸；復(fù)溶后于-20℃保存，避免反復(fù)凍融。
實驗流程
1.冰上制備如下CRISPR反式剪切反應(yīng)體系：
組分 | 體積 | 終濃度 |
10 × HOLMES Buffer 1 | 2 μL | 1 × |
5 μM LbCas12a Nuclease a | 1 μL | 250 nM |
10 μM crRNA | 0.5 μL | 250 nM |
1 μM Target DNA | 0.5~5 μL | 25~250 nM |
10 μM HOLMES ssDNA Reporter（#31101） | 0.5 μL | 250 nM |
Nuclease-free water | Up to 20 μL |
a.V32108E 系列 LbCas12a 每管含有 100 μg 的 LbCas12a 凍干粉，建議每管加入 136 μL 復(fù)溶液，復(fù)溶后酶濃度為 5 μM，即 5 pmol/μL。
2.立即放入實時熒光定量PCR儀檢測熒光信號，37℃反應(yīng)，每30 sec采集一次熒光信號。
實驗結(jié)果
注意事項
2. 為防止 RNase 污染，請保持實驗區(qū)干凈整潔，操作時需穿戴干凈的手套、口罩，實驗所用槍頭、離心管等耗材均為 RNase-free。
3. 本產(chǎn)品僅包含 Cas 酶，CRISPR 反應(yīng)體系中所需的 Target DNA 和 crRNA 需要自己制備，10 × HOLMES Buffer 1 (#32005)和 10 μM HOLMES ssDNA Reporter (#31101)推薦從 TOLOBIO 選購。
4. 復(fù)溶后的 LbCas12a 需在冰上配制反應(yīng)體系，且使用后立即將酶置于-20℃保存 (-20℃可保存一個月)。
5. 本產(chǎn)品僅供科研使用。
