X-33是畢赤酵母菌株，屬于真核細胞。一般的針對原核生物的抗生素例如卡那和氨芐對酵母是無效的因此為了防止大腸桿菌等原核生物對酵母培養(yǎng)菌株污染往往會在培養(yǎng)基中加入一些氨芐和kanameisu的

抗生素,來抑制細菌菌的污染和生長畢赤酵母話宜的生長溫度是28至30℃溫度超過32C對蛋白的

表達是有害的，并可能導(dǎo)致細胞的死亡

X-33畢赤酵母被推薦用來表達含有Zeocin抗性的載體載體重組質(zhì)粒，例如pPICZABC系列的載體。在篩選X-33重組轉(zhuǎn)化菌株時，Zeocin抗生素的工作濃度是100ug/ml

基因型為:野生型;表型:Mut+。

操作方法:

1.取0.1-5ug質(zhì)粒DNA(線性化質(zhì)粒加入量5-50μg)和10uL 預(yù)變性 Carrier DNA，加入到未融化的100-200uL感受態(tài)細胞上，置于30℃水浴每隔15S顛倒混勻，直至感受態(tài)細胞剛好wanquan融化(融化后及時取出)。

2.加入1.4 mL B2 溶液穎倒混勻。30℃水浴60min每隔20min顛倒混勻。

3.3000rpm離心3min棄上清留菌體沉淀，加入1mLB3溶液重懸菌體。

4.3000rpm離心3min 棄上清留菌體沉淀，加入100uL B3溶液重懸菌體。

5.將100uL菌液全部涂布到相應(yīng)的平板培養(yǎng)基，30℃恒溫培養(yǎng)3-5天，直至平板出現(xiàn)酵母克隆

注意事項:

1.初次使用 Carrier DNA.請把裝有Carrier DNA的管子在沸水中煮沸5min，然后立即放在冰

上,用后放在-20℃儲存?zhèn)溆谩Ｏ麓问褂们罢堄诒辖鈨鯟arrier DNA反復(fù)凍融3-5次后需重新變性 Carrier DNA

2.轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)粒可相應(yīng)減少最終用于涂板的菌量。

3.同時轉(zhuǎn)化 2-3 種質(zhì)粒時可增加質(zhì)粒的用量

4.畢赤酵母適宜的生長溫度是28℃至30℃，溫度超過32℃對蛋白的表達是有害的，并可能導(dǎo)致細胞的死亡。