細胞系的培養與傳代——血清選擇

沃博生物代理的NEWZERUM新西蘭品牌血清品牌具有百年歷史，血源來源新西蘭和澳大利亞具有出口資質的屠宰場，zui大單批次量可達 2000L,確保同一批次質量同時提供充足的血清供應七次無菌過濾，zui后三次為0.1 µm無菌過濾處理，進行細菌、真菌、支原體、病毒及病毒抗體檢測，符合動物協會要求。

產品詳情

描述：
       內毒素含量極低 <5EU/ml(規定：特級胎牛血清<10 EU/ml)
       極利于細胞的生長和傳代 ，適合各種細胞培養
       每個批號血清均具有完整的檢驗報告
       七次無菌過濾，zui后三次為0.1 µm無菌過濾處理
       進行細菌、真菌、支原體、病毒及病毒抗體檢測，符合動物協會要求
       每個批號血清庫存量達500-1000升，保證供應充足
特點：
       極低內毒素，支持各類難養細胞;
       同批號跟蹤發貨，確保實驗數據連續穩定;
       海外廠家直供，市場價格透明;
       十年誠懇信譽，溫暖售后保證!
建議使用范圍：
      科研使用; 細胞培養

推薦血清融化方法：

注意：
♦ 在水浴過程中，血清的平面要*浸在水中。在融化過程中要慢慢搖動，使血清混勻，但不要產生泡沫!
♦胎牛血清不推薦熱滅活。
儲存：
       -20°C凍存，4°C保存不超過1個月。反復凍融會破壞血清中有效成分，影響血清品質。

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細胞系的培養與傳代
簡介（INTRODUCTION）
細胞在培養瓶長成致密單層后，已基本上飽和，為使細胞能繼續生長，同時也將細胞數量擴大，須進行傳代再培養。傳代培養也是一種將細胞種保存下去的方法。同時也是利用培養細胞進行各種實驗的必經過程。懸浮型細胞直接分瓶就可以，而貼壁細胞需經消化后才能分瓶。
材料（MATERIALS）
o  試劑（REAGENTS）
    *培養基（RPML1640或DMEM），胰蛋白酶消化液,1XPBS
o  試劑準備（REAGENT SETUP）
1XPBS:NaCl 8g，KCl 0.2g，Na2HPO4•12H2O 3.63g，KH2PO4 0.24g，溶于900ml；雙蒸水中，用鹽酸調pH值至7.4，加水定容至1L,高溫滅菌后4℃保存,也可配制10XPBS室溫保存；
*培養基：90%液體培養基+10%小牛血清（特殊需要會標注在培養基說明書上）；
胰蛋白酶消化液：0.25g的胰蛋白酶和0.02g的EDTA加入1XPBS，終體積為100ml，pH7.4，0.22um濾過除菌分裝，4℃保存。
o  器械（EQUIPMENT）
EP管、15ml離心管、離心機、細胞培養箱
實驗步驟（PROCEDURE）
貼壁細胞傳代與培養 ?預期時間消耗：30min
1.  倒置顯微鏡下觀察細胞形態，確定細胞是否需要傳代，并將培養基與PBS置于37℃水浴，
胰酶消化液室溫放置，點燃酒精燈，將所需試劑擺放到相應位置；
2．用1ml槍頭棄去培養皿中上清液，加入3ml 1XPBS洗滌兩遍，加入胰酶消化液1ml，輕輕搖晃后放于細胞培養箱中1min（可酌情增加時長），可以放在倒置顯微鏡下觀察，當細胞收回突起變圓即可；
3．加入6ml培養基并吹打培養皿底，將細胞移入離心管中，1000rpm 3min離心；
4．棄上清，加入1ml培養基吹打均勻，用細胞計數板計數后取需要的細胞數量加入到新的培養基中，搖晃均勻；
5．放置培養箱中培養，可以每天觀察，期間如果細胞培養基營養不夠可更換成新鮮培養基。
▲關鍵步驟：控制好消化時間，有些貼壁細胞貼壁較緊，需要確保吹打均勻。
懸浮細胞傳代與培養 ?預期時間消耗：30min
1．倒置顯微鏡下觀察細胞形態，確定細胞是否需要傳代，并將培養基與PBS置于37℃水浴，胰酶消化液室溫放置
2．點燃酒精燈，將所需試劑擺放到相應位置
3．將培養皿中培養基移入15ml離心管中，800rpm離心5min
4．棄上清，用2ml 1XPBS洗滌兩次，每次800rpm離心5min
5．加入1ml*培養基，細胞計數后取需要的細胞數量加入到新的培養基中，搖晃均勻
▲關鍵步驟：吹打細胞需要輕柔，并且混合均勻。
針對性建議（TROUBLESHOOTING）
細胞培養條件會根據不同細胞要求不同，以下是總結的條件：
1. 293：人腎上皮細胞， 10%FBS DMEM，從培養皿板底吹下傳代；
2. BHK‐21：幼地鼠腎細胞， 10%FBS DMEM，胰酶消化傳代；
3. NK92：人的 NK 細胞系（懸浮細胞系）， 12.5%FBS +12.5%horseserum α‐mem， 100U/ml 的 IL‐2；
4. MCF‐7：人乳腺癌細胞， 10%FBS DMEM， PBS 沖洗兩次胰酶消化傳代；
5. L929： 1:3 傳代，擴大培養去上清。長滿后取走上清，換新鮮培養基，過 2,3 天可以取用，一共可以取兩批；
6. HT‐29：結腸癌細胞。 10%FBS DMEM， PBS 沖洗兩次胰酶消化傳代；
7. 293T： 10%FBS DMEM，從培養皿板底吹下傳代；
8. DC2.4： 10%FBS DMEM，胰酶消化傳代；
9. Hela: 人宮jing癌細胞。 10%FBS DMEM， PBS 沖洗兩次胰酶消化傳代。 2ml 長三天滿；
10. Thp1: 10%FBS 1640 培養， 3 天一代，細胞長過影響狀態，小瓶留 2ml 傳代，大瓶留 7ml 傳代；  
11. HepG2:人肝癌細胞系。 10%FBS DMEM， PBS 沖洗兩次胰酶消化傳代；
12. LO2: 正常 10%FBS DMEM， PBS 沖洗兩次胰酶消化傳代；
13. Huh 7: 人肝癌細胞系。 10%FBS DMEM， PBS 沖洗兩次胰酶消化傳代；
14. Hepa1‐6(mice liver cancer cells): 10%FBS DMEM， PBS 沖洗兩次胰酶消化傳代；
15. NCTC 1149(mice liver cells): 10% horse serum DMEM， PBS 沖洗。