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上海雅吉生物科技有限公司
主營(yíng)產(chǎn)品： 培養(yǎng)原代細(xì)胞,細(xì)胞系價(jià)格,耐藥細(xì)胞株,實(shí)時(shí)熒光pcr試劑盒 |
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- www.yajimall.com
| 參考價(jià) | ￥ 3280 |
| 訂貨量 | 1 |
- 型號(hào)
- 品牌
- 廠商性質(zhì) 生產(chǎn)商
- 所在地 上海市
更新時(shí)間：2019-05-30 17:29:48瀏覽次數(shù)：190
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人骨髓內(nèi)皮祖原代細(xì)胞分離自骨髓；骨髓是機(jī)體的造血組織，位于身體的許多骨骼內(nèi)。成年動(dòng)物的骨髓分兩種：紅骨髓和黃骨髓。紅骨髓能制造紅細(xì)胞、血小板和各種白細(xì)胞。血小板有止血作用，白細(xì)胞能殺滅與抑制各種病原體，包括細(xì)菌、病毒等；某些淋巴細(xì)胞能制造抗體。因此，骨髓不但是造血器官，它還是重要的免疫器官。骨髓是存在于長(zhǎng)骨（如肱骨、股骨）的骨髓腔和扁平骨（如髂骨）的稀松骨質(zhì)間的網(wǎng)眼中，是一種海綿狀的組織，能產(chǎn)生血細(xì)胞的骨髓略呈紅色，稱為紅骨髓。出生時(shí)，紅骨髓充滿全身骨髓腔，隨著年齡增大，脂肪細(xì)胞增多，相當(dāng)部分紅骨髓被黃骨髓取代，后幾乎只有扁平骨骨髓腔中有紅骨髓。骨髓單核細(xì)胞是一種未成熟的單核細(xì)胞，在骨髓細(xì)胞中約占0.04%，被認(rèn)為是破骨細(xì)胞的前體細(xì)胞，較外周血單個(gè)核細(xì)胞誘導(dǎo)的破骨細(xì)胞得率高、全骨髓誘導(dǎo)法產(chǎn)生的破骨細(xì)胞數(shù)量多，純度高，較脾細(xì)胞誘導(dǎo)法分化效率高。骨髓單核細(xì)胞（BMMNCs）是從股骨或脛骨骨髓中分離提取出來的原代細(xì)胞，它屬干細(xì)胞類型。目前，大多數(shù)研究用淋巴細(xì)胞分離液分離提取骨髓單核細(xì)胞，近也有采用免疫磁珠分離法分離骨髓單核細(xì)胞。
本公司生產(chǎn)的骨髓單核細(xì)胞采用密度梯度離心法結(jié)合差速貼壁法制備而來，細(xì)胞總量約為5×10^5cells/瓶；細(xì)胞經(jīng)CD68免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
5.培養(yǎng)基信息：
DMEM-F12、FBS、Glutamine、Penicillin、Streptomycin等
我們推薦使用人骨髓單核細(xì)胞*培養(yǎng)基（產(chǎn)品貨號(hào)：CM-H185）作為體外培養(yǎng)人骨髓單核細(xì)胞的培養(yǎng)基。
人骨髓內(nèi)皮祖原代細(xì)胞培養(yǎng)過程中，傳代是非常重要的環(huán)節(jié)，若操作不當(dāng)會(huì)給細(xì)胞帶來不可逆轉(zhuǎn)的傷害，原代細(xì)胞因其培養(yǎng)難度高且傳代次數(shù)有限，細(xì)胞消化的步驟需要格外細(xì)心與謹(jǐn)慎。生物根據(jù)其豐富的原代細(xì)胞培養(yǎng)經(jīng)驗(yàn)，總結(jié)出一套細(xì)胞消化的方法，有效降低了消化步驟對(duì)細(xì)胞的操作。現(xiàn)分享給大家：
1. 當(dāng)細(xì)胞達(dá)到80-90%融合時(shí)需要傳代培養(yǎng)。
2. 提前準(zhǔn)備好多聚賴氨酸（PLL，貨號(hào)KL0403）或纖維粘連蛋白（BPF，貨號(hào)KL8248）包被好的培養(yǎng)瓶。
3. 將*培養(yǎng)基，胰酶/EDTA消化液（T/E，貨號(hào)KL0103），胰胰中和液（TNS，貨號(hào)KL0113）和不含鈣鎂離子的DPBS（貨號(hào)KL0303）加熱至室溫。我們不推薦用37度水浴加熱試劑和培養(yǎng)基。
4. 用DPBS沖洗細(xì)胞。
5. 以T-75培養(yǎng)瓶為例，向培養(yǎng)瓶中加入8mlDPBS，然后加入2ml胰酶/EDTA消化液。輕輕搖動(dòng)培養(yǎng)瓶保證細(xì)胞被胰酶/EDTA消化液*覆蓋。將培養(yǎng)瓶置于37度培養(yǎng)箱1-2分鐘直到細(xì)胞變圓。在顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)變化。
6. 在消化期間，準(zhǔn)備一支50ml離心管加入5ml胎牛血清（FBS，貨號(hào)KL0500）。
7. 將胰酶/EDTA消化液從培養(yǎng)瓶中吸出至50ml離心管中（一小部分細(xì)胞已消化下來），將培養(yǎng)瓶繼續(xù)置于37度培養(yǎng)箱中1-2分鐘（此時(shí)培養(yǎng)瓶中沒有液體）。
8. 在孵化結(jié)束時(shí)，輕輕拍打培養(yǎng)瓶側(cè)面使細(xì)胞脫離表面。在顯微鏡下檢查以確保所有細(xì)胞已脫離。
9. 向培養(yǎng)瓶中加入5ml胰酶中和液，將消化后的細(xì)胞轉(zhuǎn)移至50ml離心管中。再加入5ml胰酶中和液沖洗培養(yǎng)瓶，以保證所有細(xì)胞被收集。
10. 在顯微鏡下觀察剩余細(xì)胞數(shù)量以確定是否收集成功，細(xì)胞數(shù)量應(yīng)小于5%。
11. 以1000轉(zhuǎn)/分離心收取的細(xì)胞懸液5分鐘，然后在培養(yǎng)基中重懸細(xì)胞。
12. 細(xì)胞計(jì)數(shù)，然后將細(xì)胞以推薦的細(xì)胞密度接種在包被好的培養(yǎng)瓶中。
