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細胞凋亡(Apoptosis)的檢測方法有形態學、生物化學、DNA片段化檢測方法以及TUNEL等標記片段化DNA方法,但從細胞凋亡概念產生的歷史及準確性方面考慮,使用顯微鏡進行的形態學觀察也是很重要的。細胞死亡的檢測可以通過熒光色素染色區分活細胞、死細胞,測定細胞代謝活性和形態學觀察。這些方法都是利用細胞凋亡這種情況進行測定的,因而不一定反映實際情況。MTT法是測定線粒體中*酶的活性,反映細胞數目的變化,其結果與細胞死亡的數目未必**。
(Acridine Orange, AO)屬于三環雜芳香燃料,可以標記DNA、RNA,屬于異染性熒光染料, AO常用于細胞內DNA和RNA進行檢測。AO與核酸結合方式主要有:1、插入性結合,AO嵌入核酸雙鏈的堿基對之間,這種結合方式主要為AO與DNA的結合,其熒光發射峰為530nm,激發后呈綠色熒光;2、靜電吸引,帶正電荷的AO與單鏈核酸的磷酸根(帶負電荷)產生靜電間的吸引結合,這種結合方式主要為AO與RNA的結合,其熒光發射峰為640nm,激發后呈紅色熒光,少量結合會呈桔黃色或桔紅色熒光。因此,嵌合到雙鏈DNA分子中顯綠色,與DNA單鏈或RNA結合時發橙紅色熒光。
溴化乙錠(Ethidium Bromide,EB)嵌合到雙鏈DNA或RNA的堿基對中,無堿基特異性,發紅色熒光。可透過活細胞膜,EB不能通過與活細胞膜具有相同通透性的細胞膜。
AO/EB雙熒光染色試劑盒注意事項:
1、用能通過活細胞膜與DNA結合后發藍色熒光的Hoechist 33342和只能通過死細胞與DNA結合后發紅色熒光的化( propidium iodide,PI)對細胞進行雙染的方法也比較常用。
如有低溫離心機進行離心效果更佳。
操作過程中應注意減少試劑(A)、試劑(B)暴露于強光下的時間。
EB solution有一定毒性,請小心操作。
為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。
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