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上海通蔚生物有限公司
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閱讀:347發布時間:2020-1-10
血清是常用的標本,血漿一般可視為與血清同等的標本,標本引起的假陽性和假陰性成果主要是攪擾性物質所致,ELISA試劑盒分為內源性物質和外源性物質兩種:
內源性物質
普遍認為大約40%的人血清標本中含有非特異性攪擾物質,能夠不同程度影響檢測成果。常見的攪擾物質有:類風濕因子、補體、嗜異性抗體、嗜靶抗原本身抗體、醫源性誘導的抗鼠Ig (s)抗體、穿插反應物質和其它物質等。
(1)類風濕因子
人血清中IgM、IgG型類風濕因子(RF)能夠與ELISA體系中的捕獲抗體及酶符號二抗的FC段直接結合,然后導致假陽性。處理該狀況的方法是:①用F(ab)2替代完好的IgG;②標本用聯有熱變性(63℃,10 min)IgG的固相吸附劑處理(將熱變性IgG參加到標本稀釋液中相同有效);③檢測抗原時,能夠用2-巰基乙醇等參加到標本稀釋液中,使RF降解。
(2)補體
ELISA體系中固相一抗和符號二抗過程中,ELISA試劑盒抗體分子發作變構,其FC段的補體C1q分子結合位點被暴露出來,使C1q 能夠將二者連接起來,然后造成假陽性。處理的方法是:①用EDTA稀釋標本;②用53℃,10 min或56℃,30 min加熱血清使C1q滅活。
(3)嗜異性抗體
人類血清中含有能與嚙齒類動物(如鼠等)Ig (s) 結合的天然嗜異性抗體,可將ELISA體系中一抗和二抗連接起來,也能造成假陽性。處理的方法是:可在標本稀釋液中參加過量的動物Ig (s) ,但參加量缺乏或亞類不一起無效。
(4)嗜靶抗原的本身抗體
抗甲狀腺球蛋白、抗胰島素等嗜靶抗原的本身抗體,ELISA試劑盒有時能與靶抗原結合形成復合物,在ELISA方法中均可攪擾抗原抗體測定成果。為防止以上狀況呈現,處理的方法是:測定前需用理化方法將其解離后再測定。
(5)標本凝聚不全
在沒有促凝劑和抗凝劑存在的狀況下,正常血液收集后1/2~2h開始凝結,18~24h*凝結。臨床查驗工作中,有時為了爭取時間快速檢測,常在血液還未開始凝結時即強行離心別離血清,此刻的血清中仍殘留部分纖維蛋白原,在ELISA試劑盒測定過程中能夠形成肉眼可見的纖維蛋白塊,易造成假陽性成果;這類狀況于次日復查時因血凝已*,血清中不再有纖維蛋白原存在,故復查成果變為陰性。為防止上述攪擾作用,處理的方法是血液標本收集后有必要使其充沛凝結后再別離血清,或標本收集時用帶別離膠的*或于*中參加適當的促凝劑。
(6)人ELISA試劑盒標本管中添加物質的影響
抗凝劑(如肝素,EDTA)、酶抑制劑(如NaN3可抑制ELISA體系中辣根過氧化物酶活性)及快速別離血清的別離膠等均對ELISA測定有一定攪擾作用。
經過以上的分析和總結,查驗ELISA測定中呈現假陽性或假陰性等錯誤的成果,掃除ELISA試劑盒因素和操作因素,再有便是從標本因素進行分析,并應采取相應措施掃除攪擾,然后保證檢測成果的準確性。
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