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北京締一生物科技有限公司
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*12測定用培養基*采用萊士曼氏乳酸桿菌（ATCC 7830）作為測定用菌，進行*12的微生物法測定。
原理
乳酸桿菌生長需要特別的營養，因而在非選擇性培養基上很難生長。維生素測定用培養基用于維生素的微生物法測定。該方法需要三種培養基：即維持培養基，用于保持菌種活力；接種培養基，用于測試菌液的制備；測定用培養基，用于待測維生素的定量。
維生素B12測定用培養基，不含維生素B12，但包含所有其他維生素和必要養分，用于萊士曼乳酸桿菌（ATCC 7830）的生長。萊士曼乳酸桿菌（ATCC7830）作為測定用菌，早由Capp等人描述（1）并被美國藥典和美國分析化學家協會（AOAC）所*（2，3）。
用已知稀釋度的維生素B12標準品，可以制備標準曲線（2，3）。
測試菌液的制備是將將活化后的菌株接種到乳酸桿菌肉湯培養基中，*在37°C 孵育24 小時，再離心、清洗、重懸于10 ml 生理鹽水中，再通過濁度分析或酸度分析，確定生長反應。用維生素B12的濃度及對應的吸光度制作標準曲線。用標準曲線可確定待測樣本中的維生素B12的濃度。
應非常小心地避免培養基和玻璃器具的污染。應使用潔凈的無去污劑的玻璃器具。少量的外源物質的污染可能導致錯誤的結果。
用于接種的測定菌應在的培養基中培養。
應用
維生素B12測定用培養基*采用萊士曼氏乳酸桿菌（ATCC 7830）作為測定用菌，進行維生素B12的微生物法測定。
培養基組分
成分 | 克/升 |
無維生素酸水解酪蛋白 | 15.000 |
葡萄糖 | 40.000 |
天* | 0.200 |
醋酸鈉 | 20.000 |
抗壞血酸 | 4.000 |
L-* | 0.400 |
DL-* | 0.400 |
硫酸腺嘌呤 | 0.020 |
* | 0.020 |
黃嘌呤 | 0.020 |
核黃素（維生素B2） | 0.001 |
鹽酸硫胺素 | 0.001 |
* | 0.00001 |
* | 0.002 |
對氨基苯甲酸（PABA） | 0.002 |
* | 0.001 |
鹽酸吡哆醇 | 0.004 |
鹽酸吡哆醛 | 0.004 |
* | 0.0008 |
* | 0.0002 |
磷酸二氫鉀 | 1.000 |
* | 1.000 |
* | 0.400 |
氯化鈉 | 0.020 |
* | 0.020 |
硫酸錳 | 0.020 |
聚山梨酯80 | 2.000 |
鹽酸* | 0.020 |
終pH值 (25°C) 6.1±0.2
質量控制
? 外觀——奶油色至黃色，具均勻性，傾向形成可容易分解成粉末狀的軟塊
? 制備好的培養基顏色和透明度——淡琥珀色透明溶液，可能有輕微沉淀
? 配比濃度——在25°C下8.5%w/v(8.5g/100ml水）水溶液，pH值為6.1±0.2
? pH值——5.90-6.30
配置
稱取8.45g干粉培養基溶于100ml蒸餾水，必要時加熱使培養基*溶解。混勻，使輕微的沉淀均勻分布。測定時，分裝試管，每管為5ml培養基（包含標準品和待測樣品）。加蒸餾水，使總體積達到10ml。高壓消毒15磅121°C 5分鐘。立即冷卻培養基。每個試管(10 ml)的維生素B12水平為0、0.025、0.05、0.075、0.1、0.125、0.15、0.2 ng時，均可獲得滿意結果。
培養反應
進行微生物法測定維生素B12。采用萊士曼氏乳酸桿菌（ATCC7830），35-37°C孵育18-24小時。
生長狀況
隨著測定管標準品水平升高，（美國藥典維生素B12標準水平，0，0.025，0.050，0.075，0.1，0.125，0.150，0.2ng)，目標菌生長逐漸遞增，伴隨著620nm處吸光度的增加。
參考文獻
1. Capps B. E., Hobbs M. H. H. and Fox S. H.,1949, J. Biol. Chem., 178:517.
2. The UnitedStates Pharmacopoeia, 2006, USP29/NF24, The United States PharmacopeialConvention, Rockville, MD.
3. H. Williams, (Ed.), 2005, Official Methods of Analysisof the Association of Official Analytical Chemists, 19th Ed., AOAC,Washington,D.C
產品引用文獻
貨號 | 產品 | 規格 | 存儲 | 效期 |
| M036 | *12測定用培養基 | 100g | 干粉：8°C下密閉保存，理想是置于干燥器中。 請使用新鮮制備的培養基。 | 30個月 |
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