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Rosetta-gami(DE3)plysS大腸桿菌

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更新時間:2018-06-14 15:37:27瀏覽次數:295次

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Rosetta-gami(DE3)plysS大腸桿菌Rosetta-gami(DE3)pLysS菌株來源于Rosetta-gami(DE3)菌株,同時集合了Origami(DE3)和Rosetta(DE3)的優點,除具有Rosetta-gami(DE3)菌株的有點外,還含有pLySs質粒。pLySs質粒能夠產生T7溶菌酶,可以有效降低目的基因的基礎表達水平。pLySs質粒的起始復制位點是p15 O

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Rosetta-gami(DE3)plysS大腸桿菌

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Rosetta-gami(DE3)plysS大腸桿菌

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Rosetta-gami(DE3)pLysS菌株來源于Rosetta-gami(DE3)菌株,同時集合了Origami(DE3)和Rosetta(DE3)的優點,除具有Rosetta-gami(DE3)菌株的有點外,還含有pLySs質粒。pLySs質粒能夠產生T7溶菌酶,可以有Rosetta-gami(DE3)plysS大腸桿菌效降低目的基因的基礎表達水平。pLySs質粒的起始復制位點是p15 Origin, 這使得該質粒能夠和pUC-及pBR322-衍生的質粒互相共存。

Rosetta-gami(DE3)pLysS細胞同時具有氯霉素,卡那,鏈霉素和四環素四種抗生素抗性,被建議使用于含有Bla標記的氨芐抗性表達質粒。適用于pET系列載體及其他T7啟動子系列載體。

RNA提取法:試劑中的主要成分為異硫氰酸胍和苯酚,其中異硫氰酸胍可裂解細胞,促使核蛋白體的解離,使RNA與蛋白質分離,并將RNA釋放到溶液中。當加入氯時,它可抽提酸性的苯酚,而酸性苯酚可促使RNA進入水相,Rosetta-gami(DE3)plysS大腸桿菌離心后可形成水相層和有機層,這樣RNA與仍留在有機相中的蛋白質和DNA分離開。水相層(無色)主要為RNA,有機層(黃色)主要為DNA和蛋白質。
實驗步驟:
1、RNA的提取;
2、反轉錄合成cDNA;
3、PCR擴增;
4、產物的電泳和結果的測定。
RT-PCR是將RNA的反轉錄(RT)和cDNA的聚合酶鏈式擴增(PCR)相結合的技術。首先經反轉錄酶的作用從RNA合成 cDNA,再以cDNA為模板,擴增合成目的片段。RT-PCR可以一步法或兩步法的形式進行。在兩步法RT-PCR中,每一步都在zui條件下進行。
堿變性提取質粒DNA是基于染色體DNA與質粒DNA的變性與復性的差異而達到分離目的。在pH高達12.6的堿性條件下,染色體DNA的氫鍵斷裂,雙螺旋結構解開而變性。質粒DNA的大部分氫鍵也斷裂,但超螺旋共價閉合環狀的兩條互補鏈不會*分離,當以pH4.8的NaAc高鹽緩沖液去調節其pH至中性時,變性的質粒DNA又恢復原來的構型,保存在溶液中,而染色體DNA不能復性而形成纏連的網狀結構,通過離心,染色體DNA與不穩定的大分子RNA、蛋白質-SDS復合物等一起沉淀下來而被除去。
Rosetta-gami(DE3)plysS大腸桿菌關產品列表:

山羊抗兔IgG,異硫氰酸熒光素標記

山羊抗兔IgG,藻紅蛋白標記

山羊抗兔IgG,熒光素488標記

山羊抗兔IgG,熒光素555標記

山羊抗小鼠IgG,異硫氰酸熒光素標記

山羊抗小鼠IgG,藻紅蛋白標記

b-巰基乙醇,電泳級

SDS溶液,10%,電泳級

Tricine 干粉,電泳級 

MALDI蛋白樣品處理試劑盒

Earle溶液

Hanks溶液

D-Hanks溶液

胰酶消化液(含EDTA)


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