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超快核酸轉膜試劑盒B(尼龍膜)

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更新時間:2018-06-12 15:43:45瀏覽次數:649次

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產品簡介

超快核酸轉膜試劑盒B(尼龍膜)本產品是基于毛細管轉膜法的Southern和Northern印跡膜制備試劑,專門用于從電泳得到的凝膠中制備用于Southern雜交和Northern雜交的印跡膜。本產品具有下列特點:
1. 即開即用,提供制備5張13×20cm大小的Southern雜交和Northern雜交印跡膜所需要的溶液,不需要用戶單獨準備。

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超快核酸轉膜試劑盒B(尼龍膜)

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超快核酸轉膜試劑盒B(尼龍膜)

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本產品是基于毛細管轉膜法的Southern和Northern印跡膜制備試劑,專門用于從電泳得到的凝膠中制備用于Southern雜交和Northern雜交的印跡膜。本產品具有下列特點:

1. 即開即用,提供制備5張13×20cm大小的Southern雜交和Northern雜交印跡膜所需要的溶液,不需要用戶單獨準備。

2. 快速:轉膜過程只需要1小時,整個過程只需要2.5小時(對DNA)或1.5小時(對RNA)。

3. 跟硝酸纖維素膜、帶電尼龍膜、中性尼龍膜和PVDF膜兼容。包括Nytron、Gene Screen Plus、Zetabind、Biotrans、Hybond-N、Immobilon等。

4. 使用優化的下向轉膜法,不但效率比上行轉膜法高30%左右,而且條帶彌散度低、分辨率高。

5. 可用瓊脂糖膠(包括脈沖電泳膠,DNA電泳、RNA甲醛膠電泳和RNA戊二醛電泳)和DNA PAGE膠。

RNA提取法:試劑中的主要成分為異硫氰酸胍和苯酚,其中異硫氰酸胍可裂解細胞,促使核蛋白體的解離,使RNA與蛋白質分離,并將RNA釋放到溶液中。當加入氯時,它可抽提酸性的苯酚,而酸性苯酚可促使RNA進入水相,離心后可形成水相層和有機層,這樣RNA與仍留在有機相中的蛋白質和DNA分離開。水相層(無色)主要為RNA,有機層(黃色)主要為DNA和蛋白質。
實驗步驟:
1、RNA的提取;
2、反轉錄合成cDNA;
3、PCR擴增;
4、產物的電泳和結果的測定。
RT-PCR是將RNA的反轉錄(RT)和cDNA的聚合酶鏈式擴增(PCR)相結合的技術。首先經反轉錄酶的作用從RNA合成 cDNA,再以cDNA為模板,擴增合成目的片段。RT-PCR可以一步法或兩步法的形式進行。在兩步法RT-PCR中,每一步都在zui條件下進行。
堿變性提取質粒DNA是基于染色體DNA與質粒DNA的變性與復性的差異而達到分離目的。在pH高達12.6的堿性條件下,染色體DNA的氫鍵斷裂,雙螺旋結構解開而變性。質粒DNA的大部分氫鍵也斷裂,但超螺旋共價閉合環狀的兩條互補鏈不會*分離,當以pH4.8的NaAc高鹽緩沖液去調節其pH至中性時,變性的質粒DNA又恢復原來的構型,保存在溶液中,而染色體DNA不能復性而形成纏連的網狀結構,通過離心,染色體DNA與不穩定的大分子RNA、蛋白質-SDS復合物等一起沉淀下來而被除去。
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