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上海聯(lián)邁生物工程有限公司
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更新時間：2018-06-08 15:49:24瀏覽次數(shù)：240次
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大提柱式DNA清除劑本產(chǎn)品是的柱式DNA清除劑（CAT#：90318）的大提升級產(chǎn)品，可用于細(xì)胞總RNA樣品中基因組DNA污染的去除。目前較常用的RNase-free DNase處理方法因DNase中所含殘留的RNase能破壞RNA完整性而具有很大缺陷。本公司開發(fā)的大提柱式非酶DNA清除劑不但*避免了RNase-free DNase的這一缺陷，同時還具有下列特點。
1. 處理量大，一次可以處理高
大提柱式DNA清除劑
名稱 | 規(guī)格 | 價格 | 手冊 |
大提柱式DNA清除劑 | 5次 | 詢價 |
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本產(chǎn)品是的柱式DNA清除劑（CAT#：90318）的大提升級產(chǎn)品，可用于細(xì)胞總RNA樣品中基因組DNA污染的去除。目前zui常用的RNase-free DNase處理方法因DNase中所含殘留的RNase能破壞RNA完整性而具有很大缺陷。本公司開發(fā)的大提柱式非酶DNA清除劑不但*避免了RNase-free DNase的這一缺陷，同時還具有下列特點。
1. 處理量大，一次可以處理高達400 μg的總RNA。
2. 操作簡單快速，全部操作只需要十余分鐘。
3. 回收率高達80%以上。
4. 高效，能使總RNA中的基因組DNA污染降低到電泳檢測不到的水平，而RNA分子完整性不受任何影響。
5. 本身不含RNase污染，避免了用DNase處理的zui大問題。
6. 穩(wěn)定，本產(chǎn)品為非酶產(chǎn)品，可以常溫運輸和4℃長期保存；而RNase-free DNase的運輸和長期保存必須在低溫進行。
7. 性價比高，單位成本遠(yuǎn)低于RNase-free DNase。
RNA提取法：試劑中的主要成分為異硫氰酸胍和苯酚，其中異硫氰酸胍可裂解細(xì)胞，促使核蛋白體的解離，使RNA與蛋白質(zhì)分離，并將RNA釋放到溶液中。當(dāng)加入氯時，它可抽提酸性的苯酚，而酸性苯酚可促使RNA進入水相，離心后可形成水相層和有機層，這樣RNA與仍留在有機相中的蛋白質(zhì)和DNA分離開。水相層(無色)主要為RNA，有機層(黃色)主要為DNA和蛋白質(zhì)。
實驗步驟：
1、RNA的提取;
2、反轉(zhuǎn)錄合成cDNA;
3、PCR擴增;
4、產(chǎn)物的電泳和結(jié)果的測定。
RT-PCR是將RNA的反轉(zhuǎn)錄(RT)和cDNA的聚合酶鏈?zhǔn)綌U增(PCR)相結(jié)合的技術(shù)。首先經(jīng)反轉(zhuǎn)錄酶的作用從RNA合成 cDNA，再以cDNA為模板，擴增合成目的片段。RT-PCR可以一步法或兩步法的形式進行。在兩步法RT-PCR中，每一步都在zui條件下進行。
堿變性提取質(zhì)粒DNA是基于染色體DNA與質(zhì)粒DNA的變性與復(fù)性的差異而達到分離目的。在pH高達12.6的堿性條件下，染色體DNA的氫鍵斷裂，雙螺旋結(jié)構(gòu)解開而變性。質(zhì)粒DNA的大部分氫鍵也斷裂，但超螺旋共價閉合環(huán)狀的兩條互補鏈不會*分離，當(dāng)以pH4.8的NaAc高鹽緩沖液去調(diào)節(jié)其pH至中性時，變性的質(zhì)粒DNA又恢復(fù)原來的構(gòu)型，保存在溶液中，而染色體DNA不能復(fù)性而形成纏連的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，通過離心，染色體DNA與不穩(wěn)定的大分子RNA、蛋白質(zhì)-SDS復(fù)合物等一起沉淀下來而被除去。
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