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操作流程：
1待測(cè)樣品孔中每孔加入待測(cè)樣品100μl，每種樣品設(shè)3個(gè)平行孔；設(shè)兩個(gè)陰性對(duì)照孔，每孔加未處理組的細(xì)胞裂解液100μl；另設(shè)一個(gè)空白對(duì)照孔，加入純細(xì)胞裂解液100μl。
2酶標(biāo)板置4℃，包被過(guò)夜。
3洗板：吸干孔內(nèi)反應(yīng)液，用洗滌液過(guò)洗一遍將洗滌液注滿板孔后，即甩去，之后將洗滌液注滿板孔，浸泡1-2分鐘，間歇搖動(dòng)。甩去孔內(nèi)液體后在吸水紙上拍干。重復(fù)洗滌3-4次。
4陰性對(duì)照孔每孔加入pbs 50μl，樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人aif抗體工作液50μl。
5酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi)，孵育60min。
6洗板，同4。
7每孔加1:5000稀釋的hrp-標(biāo)記的山羊抗兔抗體工作液 100μl。
8酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi)，孵育60min。
9洗板，同4。
10每孔加tmb顯色液 100μl，輕輕混勻10s，置37℃暗處反應(yīng)15-20min。
11每孔加100μl 2mol/l h2so4終止反應(yīng)。
12分別測(cè)450nm 吸光值w1和630nm吸光值w2，終測(cè)得的od值為兩者之差w1-w2，以減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。
13數(shù)據(jù)處理：在得出標(biāo)本s和陰性對(duì)照n的 od值后，計(jì)算s/n值。s/n≥2.1為陽(yáng)性判定標(biāo)準(zhǔn)。

試劑盒組成及試劑配制：
1. 酶聯(lián)板（Assay plate ）：一塊（96孔）。
2. 標(biāo)準(zhǔn)品（Standard）：2瓶（凍干品）。
3. 樣品稀釋液（Sample Diluent）：1×20ml/瓶。
4. 標(biāo)記抗體稀釋液（Biotin-antibody Diluent）：1×10ml/瓶。
5. 辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記親和素稀釋液 （HRP-avidin Diluent）：1×10ml/瓶。
6. 標(biāo)記抗體（Biotin-antibody）：1×120μl/瓶（1：100）
7. 辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記親和素（HRP-avidin）：1×120μl/瓶（1：100）
8. 底物溶液（TMB Substrate）：1×10ml/瓶。
9. 濃洗滌液（Wash Buffer）：1×20ml/瓶，使用時(shí)每瓶用蒸餾水稀釋25倍。
10. 終止液（Stop Solution）：1×10ml/瓶（2N H2SO4）。
試劑和樣本的控制方法：
一、試劑
1.試劑的選擇：國(guó)家明確要求要采用批批檢定的形式對(duì)ELISA試劑嚴(yán)格把關(guān)，我司嚴(yán)格按照進(jìn)行，已獲得國(guó)家承認(rèn)的“三證"，每一個(gè)產(chǎn)品都有對(duì)應(yīng)的批號(hào)，只要客戶提前下單，我們就能為您提供新批次的產(chǎn)品，不必?fù)?dān)心會(huì)有過(guò)期的試劑。我司的試劑，值得您選擇。
2.試劑的準(zhǔn)備：先將試劑盒先從冰箱中拿出來(lái)，在室溫下放置20-30 min后，再進(jìn)行測(cè)定，使試劑盒在使用前與室溫平衡，這樣做的目的能使反應(yīng)微孔內(nèi)的溫度較快地達(dá)到所需的溫度，以滿足后面的測(cè)定需求。
二、樣本
1.內(nèi)源性干擾因素：包括類風(fēng)濕因子、補(bǔ)體、高濃度的非特異免疫球蛋白、異嗜性抗體、某些自身抗體等；
類風(fēng)濕因子的控制方法：
①用F(ab)2替代完整的IgG；
②標(biāo)本用聯(lián)有熱變性IgG的固相吸附劑處理；
③檢測(cè)抗原時(shí)，可用加入到標(biāo)本稀釋液中使RF降解。
ELISA 試驗(yàn)時(shí)，注意事項(xiàng)如下：
1. 正式試驗(yàn)時(shí)，應(yīng)分別以陽(yáng)性對(duì)照與陰性對(duì)照控制試驗(yàn)條件，待檢樣品應(yīng)作一式二份，以保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。有時(shí)本底較高，說(shuō)明有非特異性反應(yīng)，可采用羊血清、兔血清或BSA等封閉。
2. 在ELISA中，進(jìn)行各項(xiàng)實(shí)驗(yàn)條件的選擇是很重要的，其中包括:
（1） 固相載體的選擇：許多物質(zhì)可作為固相載體，如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維素等。其形式可以是凹孔平板、試管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何種載體，在使用前均可進(jìn)行篩選：用等量抗原包被，在同一實(shí)驗(yàn)條件下進(jìn)行反應(yīng)，觀察其顯色反應(yīng)是否均一性，據(jù)此判明其吸附性能是否良好。
（2） 包被抗體（或抗原）的選擇：將抗體（或抗原）吸附在固相載體表面時(shí)，要求純度要好,吸附時(shí)一般要求PH在9.0～9.6之間。吸附溫度，時(shí)間及其蛋白量也有一定影響,一般多采用4℃18～24小時(shí)。蛋白質(zhì)包被的zui適濃度需進(jìn)行滴定：即用不同的蛋白質(zhì)濃度（0.1、1.0和10μg／ml等）進(jìn)行包被后，在其它試驗(yàn)條件相同時(shí)，觀察陽(yáng)性標(biāo)本的OD值。選擇OD值zui大而蛋白量zui少的濃度。對(duì)于多數(shù)蛋白質(zhì)來(lái)說(shuō)通常為1～10μg／ml。
（3） 酶標(biāo)記抗體工作濃度的選擇：首先用直接ELISA法進(jìn)行初步效價(jià)的滴定（見酶標(biāo)記抗體部份）。然后再固定其它條件或采取“方陣法"（包被物、待檢樣品的參考品及酶標(biāo)記抗體分別為不同的稀釋度）在正式實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)里準(zhǔn)確地滴定其工作濃度。
（4） 酶的底物及供氫體的選擇：對(duì)供氫體的選擇要求是價(jià)廉、安全、有明顯地顯色反應(yīng)，而本身無(wú)色。有些供氫體（如OPD等）有潛在的致癌作用，應(yīng)注意防護(hù)。有條件者應(yīng)使用不致癌、靈敏度高的供氫體，如TMB和ABTS是目前較為滿意的供氫體。底物作用一段時(shí)間后，應(yīng)加入強(qiáng)酸或強(qiáng)堿以終止反應(yīng)。通常底物作用時(shí)間，以10-30分鐘為宜。底物使用液必須新鮮配制，尤其是H2O2在臨用前加入 。
TES. Na;2-[(三(羥甲基)甲基)氨基]-1-乙磺酸鈉  TES   質(zhì)量規(guī)格：>99%,AR 小鼠蛋白B(PKB)ELISA試劑盒 ，英文名： PKB ELISA Kit

TES；Tris乙磺酸,2-[（三（羥甲基）甲基）氨基]-1-乙磺酸  TES  質(zhì)量規(guī)格：>99%,AR 小鼠蛋白Bγ(PKBγ)ELISA試劑盒 ，英文名： PKBγ ELISA Kit

3-[ (N-三(羥甲基)甲氨基]-2-羥基丙磺酸鈉  TAPSO mono  質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR 小鼠蛋白Cα(PKCα)ELISA試劑盒 ，英文名： PKCα ELISA Kit

TAPSO；3-[ (N-三(羥甲基)甲氨基]-2-羥基丙磺酸  TAPSO  質(zhì)量規(guī)格：>99%,BR 小鼠蛋白Cα相互作用蛋白1(PICK1)ELISA試劑盒 ，英文名： PICK1 ELISA Kit

N-三(羥甲基)甲基-3-氨基丙磺酸鈉  TAPS  Salt  質(zhì)量規(guī)格：>99%,BR 小鼠蛋白Cδ(PKCδ)ELISA試劑盒 ，英文名： PKCδ ELISA Kit

1,1-環(huán)丙基乙二羧酸  1,1-Cyclopropanedicarboxylic acid  質(zhì)量規(guī)格：>98% 小鼠蛋白Cε(PKCε)ELISA試劑盒 ，英文名： PKCε ELISA Kit

TAPS；N-三(羥甲基)甲基-3-氨基丙磺酸  TAPS  質(zhì)量規(guī)格：>99%,細(xì)胞培養(yǎng)級(jí) 小鼠蛋白Cζ(PKCζ)ELISA試劑盒 ，英文名： PKCζ ELISA Kit

PI3K 抑制劑  LY294002  質(zhì)量規(guī)格：>98.5%,進(jìn)分 小鼠蛋白Cη(PKCη)ELISA試劑盒 ，英文名： PKCη ELISA Kit

磺酸鈉  SHES  質(zhì)量規(guī)格：>98.5% 小鼠蛋白D1(PRKD1)ELISA試劑盒 ，英文名： PRKD1 ELISA Kit

  PHES  質(zhì)量規(guī)格：>98.5% 小鼠蛋白N2(PKN2)ELISA試劑盒 ，英文名： PKN2 ELISA Kit
植物Aelisa試劑盒   植物A試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   植物A試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來(lái)源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：植物A試劑盒、植物A elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。  Trityl candesartan  中文名：  分子式：C43H34N6O3  度：98.0%

植物A(VA)ELISA試劑盒              Trimethoprim  738-70-5  中文名： 分子式：C14H18N4O3 

植物A(VA)ELISAKit                 Troxerutin  7085-55-4  中文名 分子式：C33H42O19 

植物銅鋅超氧化物歧化酶（CuZn-SOD）測(cè)試盒（比色法）  Trityl candesartan cilexetil  中文名：  分子式：C52H48N6O6  度：98.0%

植物態(tài)氮測(cè)試盒   可見分光光度法   50管/48樣              Triamcinolone acetonide  76-25-5  中文名：  分子式：C24H31FO6
小鼠胰島素樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白2(IGFBP2)elisa檢測(cè)試劑盒
Mouse TRAIL R3 檢測(cè)試劑盒人肝素輔因子II-(HCII-T)復(fù)合物elisa分析檢測(cè)試劑盒

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