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江蘇菲亞生物科技有限公司
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豬丹毒血清學(xué)診斷技術(shù)
2017-8-30 閱讀(990)
使用血清培養(yǎng)凝集試驗(yàn)方法檢出率很高，而且快速，介紹如下：
（1）血清培養(yǎng)凝集試驗(yàn)
在3％胰蛋白胨肉膏湯（或肝化湯）中，加人（1；40）一（1：80）的丹毒高免血清，同時(shí)每毫升再加入400leg卡那霉素50／lg慶大霉素及2Stag萬(wàn)古霉素（缺乏抗生素時(shí)，可加0．05％疊氦鈉及o．0005％結(jié)晶紫），制成丹毒血清抗生素診斷液（如分裝安瓿瓶管置4~C冰箱內(nèi)可至少保存2個(gè)月）。生前取病豬耳尖血1滴，死后則蘸取病料少許于安瓿瓶管內(nèi)，37~C培養(yǎng)14-24h。凡管底出現(xiàn)凝集顆粒或團(tuán)塊時(shí)即判為陽(yáng)性。
（2）熒光抗體檢查法
用熒光素標(biāo)記的豬丹毒免疫球蛋白制成熒光抗體與病料涂片中的豬丹毒病菌發(fā)生特異性結(jié)合，在熒光顯微鏡下觀察，可見(jiàn)亮綠色菌體，即可判豬丹毒陽(yáng)性，是豬丹毒快速檢疫的方法之一。
（3）Dot-PAA-ELISA方法
肖國(guó)生、曹三杰、文心田等應(yīng)用Dot-PAA-ELISA方法快速檢測(cè)豬丹毒抗體。以豬丹毒CD3004（1a型）和C43-12（2型）菌株為抗原，EDTA滲透法提取的抗原作為膜載抗原，建立了Dot-PAA-ELISA檢測(cè)豬丹毒血清抗體方法，經(jīng)研究確定了Dot-PAA-ELISA的zui*工作條件。試驗(yàn)制備的診斷膜片特異性強(qiáng)，不與豬瘟、豬偽狂犬病、豬肺疫、豬鏈球菌病、豬大腸桿菌病、仔豬副傷寒、豬布氏桿菌病、豬衣原體病的陽(yáng)性血清發(fā)生交叉反應(yīng)；靈敏度高，能夠zui低檢出豬血清中含2161X10-9g的豬IgG抗體；膜片保存期長(zhǎng)，在室溫可保存4個(gè)月，4℃可保存7個(gè)月其檢測(cè)活性不變。用該方法檢測(cè)了仔豬免疫后抗體變化，并通過(guò)豬丹毒三型混合強(qiáng)毒攻毒試驗(yàn)確定了豬能抗強(qiáng)毒攻擊的抗體臨界保護(hù)值為1：32。對(duì)336份血清進(jìn)行豬丹毒抗體檢測(cè)，陽(yáng)性檢出率為96．13％。試驗(yàn)結(jié)果表明，本試驗(yàn)方法操作簡(jiǎn)便、快速準(zhǔn)確、結(jié)果可存檔、重復(fù)性和穩(wěn)定性好，所用試劑材料均可做到標(biāo)準(zhǔn)化，適合基層檢疫單位和養(yǎng)豬企業(yè)用于豬群免疫監(jiān)測(cè)和豬丹毒流行病學(xué)調(diào)查。
