目的: 區分并鑒定樹鼩中APP基因mRNA的多種可變剪接體,對APP基因特征進行描述,并確定其在各組織中的表達分布。
方法: 參考已知人的和樹鼩基因組預測的APP基因序列,設計樹鼩APP基因mRNA剪切體外顯子的共同特異性引物。分別從樹鼩不同組織中提取總RNA,反轉錄為cDNA,利用高保真酶擴增目的剪切體DNA。根據PCR擴增產物電泳條帶的有無和大小初步判斷剪接體的型別,zui后將PCR產物膠回收進行測序鑒定,對獲得的基因進行特征描述,并結合定量PCR的結果確定了各剪接體在不同組織中分布情況。
結果: 結果表明樹鼩APP剪接體的全長為3514 bp,有一個109 bp的5'-UTR,1092bp的3'-UTP。APP基因在調查的9個物種中高度同源保守,顯示樹鼩與靈長類存在一個較近的親緣關系。通過三維建模獲得了樹鼩和人的APP基因共同擁有的4個結構域。同時確認這4種通過外顯子跳躍產生的APP可變剪接體在不同組織中的分布和表達。4種檢測到的剪接體APP770,APP695,APP751,APP677均表達于肺、腎和腸,表達量zui高的是肺、肌肉。
結論: 對樹鼩APP基因可變剪接體的表達研究,有助于推動樹鼩作為阿爾茨海默病模型深入研究疾病的發生機制和藥物研發。
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