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斜面培養基的制作方法

時間:2017/7/11閱讀:819
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    斜面培養基相對和并列的概念是:平面培養基、高層培養基。固體培養基倒在培養皿內,凝固成平面的稱為平板培養基,用于菌種分離及研究菌類的某些特性;分裝在試管內,直立凝固而制成的稱為高層培養基,這樣接入菌種后雖然發育的面小了一點,但培養基的厚度增大,營養豐富,時間長些也不容易干燥、開裂,常用于保存菌種。

1配制溶液

向容器內加入所需水量的一部分,按照培養基的配方,稱取各種原料,依次加入使其溶解,zui后補足所需水分。對蛋白胨、肉膏等物質,需加熱溶解,加熱過程所蒸發的水分,應在全部原料溶解后加水補足。

配制固體培養基時,先將上述已配好的液體培養基煮沸,再將稱好的瓊脂加入,繼續加熱至*融化。并不斷攪拌,以免瓊脂糊底燒焦。

2調節pH

pH試紙(或pH電位計、氫離子濃度比色計)測試培養基的pH值,如不符合需要,可用10%HCl10%NaOH進行調節,直到調節到配方要求的pH值為止。

3過濾

用濾紙、紗布或棉花趁熱將已配好的培養基過濾。用紗布過濾時,折疊成六層,用濾紙過濾時,可將濾紙折疊成瓦棱形,鋪在漏斗上過濾。

4分裝

已過濾的培養基應進行分裝。如果要制作斜面培養基,須將培養基分裝于試管中。如果要制作平板培養基或液體、半固體培養基,則須將培養基分裝于錐形瓶內。

分裝時,一手捏松彈簧夾,使培養基流出,另一只手握住幾支試管或錐形瓶,依次接取培養基。分裝時,注意不要使培養基粘附管口或瓶口,以免浸濕棉塞引起雜菌污染。

裝入試管的培養基量,視試管和錐形瓶的大小及需要而定。一般制作斜面培養基時,每只15×150毫米的試管,約裝34毫升(1/41/3試管高度),如制作深層培養基,每只20×220毫米的試管約裝1215毫升。每只錐形瓶裝入的培養基,一般以其容積的一半為宜。

5加棉塞

分裝完畢后,需要用棉塞堵住管口或瓶口。堵棉塞的主要目的是過濾空氣,避免污染。棉塞應采用普通新鮮、干燥的棉花制作,不要用脫脂棉,以免因脫脂棉吸水使棉塞無法使用。制作棉塞時,要根據棉塞大小將棉花鋪展成適當厚度,揪取手掌心大小一塊,鋪在左手拇指與食指圈成的圓孔中,用右手食指插入棉花中部,同時左手食指與拇指稍稍緊握,就會形成1個長棒形的棉塞。棉塞作成后,應迅速塞入管口或瓶口中,棉塞應緊貼內壁不留縫隙,以防空氣中微生物沿皺折侵入。棉塞不要過緊過松,塞好后,以手提棉塞、管、瓶不下落為合適。棉塞的2/3應在管內或瓶內,上端露出少許棉花便于拔取。塞好棉塞的試管和錐形瓶應蓋上厚紙用繩捆札,準備滅菌。

 

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