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HFL-I細(xì)胞,人胚肺成纖維細(xì)胞注意事項

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產(chǎn)品型號

品       牌

廠商性質(zhì)生產(chǎn)商

所  在  地上海市

聯(lián)系方式:辛妍查看聯(lián)系方式

更新時間:2017-11-03 10:36:18瀏覽次數(shù):255次

聯(lián)系我時,請告知來自 環(huán)保在線

經(jīng)營模式:生產(chǎn)廠家

商鋪產(chǎn)品:9950條

所在地區(qū):上海上海市

聯(lián)系人:辛妍 (銷售)

產(chǎn)品簡介

上海研盟生物提供美國ATCC傳代細(xì)胞株“HFL-I細(xì)胞,人胚肺成纖維細(xì)胞注意事項",進口來源,國內(nèi)保種,活性保證,咨詢:.

詳細(xì)介紹

 

【友情提示】:產(chǎn)品價格與說明書請?zhí)砑涌头騺黼娫儍r,索要說明書;

產(chǎn)品名稱:HFL-I細(xì)胞,人胚肺成纖維細(xì)胞注意事項

細(xì)胞特性

動物種別:人

組織來源:胚胎;肺

形態(tài):成纖維細(xì)胞樣

培養(yǎng)基和添加劑:MEMα+培養(yǎng)基(GIBCO,貨號11900024,添加NaHCO3 1.5g/L,肌醇 43.2mg/L, * 8.82mg/L,β-巰基乙醇 7.8mg/L),90%;胎牛血清,10%。 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度。

REFERENCE:Mizuta K, Abiko C, Goto H, Murata T, Murayama S. Int J Infect Dis 2003; 7:138-142. PubMed ID: 12839716 Matsui S, Matsumoto H, Sonoda Y, Ando K, Aizu-Yokota E, Sato T, Kasahara T. Int Immunopharmacol 2004; 15:1633-1644.PubMed ID: 15454116 Zhejiang Med 24(10):586-588,2002 MOLECULAR THERAPY 11(4):531,2005

含量:>1x10的6次方 個/mL
污染:支原體、細(xì)菌、酵母和真菌檢測為陰性
規(guī)格:T25瓶或者1mL凍存管包裝

基本特性:
描述:(1)所有細(xì)胞株購自ATCC;
(2) 公司可提供新鮮或凍存細(xì)胞株;
(3) 細(xì)胞株數(shù)量約 1000000個/瓶;
(4) 不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌

密度超過90%,并且細(xì)胞狀態(tài)很好時,則復(fù)溫后2個小時需要立即傳代,提供復(fù)蘇好的細(xì)胞株,貼壁及懸浮細(xì)胞形式,細(xì)胞狀態(tài)良好,飽滿、光澤度好,*,并提供細(xì)胞報價、所需培養(yǎng)基、種屬來源、組織來源、形態(tài)、背景資料等。


復(fù)蘇細(xì)胞注意事項:
1收到細(xì)胞后當(dāng)天換液,全部更換成客戶自己的新鮮培養(yǎng)基,放進培養(yǎng)箱,第二天再消化。
2邊觀察邊消化,根據(jù)細(xì)胞的形態(tài),終止消化時間,采取以半分鐘間隔吹打細(xì)胞邊緣,如可吹打下來,即終止消化。客戶摸索比較好的消化時間。
3隨細(xì)胞有一份細(xì)胞操作說明書,請客戶仔細(xì)查看。
4記得加1%雙抗,降低被污染的概率。另外盡早凍存留種,以備后用。
5售后時間為一周,*于細(xì)胞本身的質(zhì)量問題,而因乙方自己不當(dāng)操作(不規(guī)范操作,消化過度,不加雙抗導(dǎo)致的污染等)導(dǎo)致的細(xì)胞問題不在售后范疇。
6收到細(xì)胞后,如細(xì)胞狀態(tài)不佳,或培養(yǎng)中遇到問題,煩請當(dāng)天盡快,以便處理。當(dāng)天及時反饋細(xì)胞情況和細(xì)胞照片是售后跟蹤處理重要的參考依據(jù),請您務(wù)必重視。
7剛收到細(xì)胞時,胎牛血清可以用15%培養(yǎng)兩三天,利于細(xì)胞盡快恢復(fù)狀態(tài),細(xì)胞狀態(tài)穩(wěn)定后,再調(diào)回10%即可。
(其中1,2條針對于貼壁細(xì)胞,懸浮細(xì)胞詳情請見細(xì)胞操作說明書)


 
細(xì)胞用途:僅供科研使用。
                       


HFL-I細(xì)胞,人胚肺成纖維細(xì)胞注意事項復(fù)蘇方法

1.從液氮罐中取出安剖;有時因安剖未封嚴(yán),浸入了液氮,取出后因安剖內(nèi)液氮迅速氣化而發(fā)生爆炸,因此應(yīng)帶有防護眼睛和手套。

2.迅速放入盛有36℃~37℃水的搪瓷罐中,扣上蓋并不時搖動,盡快解凍。

3.剪開紗布口袋,取出安剖,用70%酒精擦拭消毒后,凈化臺上打開蓋,用吸管吸出細(xì)胞懸液,裝入離心管中,再補加10ml培養(yǎng)液,吹打使細(xì)胞懸浮。

4.低速離心(500~1000轉(zhuǎn)/分)5分鐘,取上清后再重復(fù)用培養(yǎng)液漂洗、離心。

5.加入培養(yǎng)液適當(dāng)稀釋后,再移裝入培養(yǎng)瓶中,置溫箱培養(yǎng),次日更換一次培養(yǎng)液后再繼續(xù)培養(yǎng)。

 我公司認(rèn)為購買細(xì)胞的客戶有培養(yǎng)細(xì)胞的經(jīng)驗,客戶收到細(xì)胞,原瓶里的培養(yǎng)液可以收集繼續(xù)使用,在*次消化傳瓶時,我們要求客戶留一瓶細(xì)胞繼續(xù)使用我們的培養(yǎng)液,其它瓶的細(xì)胞客戶可使用自己的培養(yǎng)液,這樣可減少由于細(xì)胞不適應(yīng)培養(yǎng)液導(dǎo)致的細(xì)胞問題。
 

來源有保障(世界*品牌),狀態(tài)且傳代次數(shù)好,經(jīng)測試不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌。每管含有細(xì)胞數(shù)>1000000個,具有高品質(zhì)、高純度、高穩(wěn)定性等特點,純化技術(shù)保證產(chǎn)品性能。
運輸方式:活細(xì)胞運輸(T-25 flasks)。
細(xì)胞純度:95%。
細(xì)胞來源:ATCC等。
包裝:內(nèi)層無菌自封袋,防壓泡沫盒,外層防壓保溫氣泡袋,說明書。

用途:本產(chǎn)品只提供給進一步的科研使用,不可應(yīng)用于治療等其他方面。

細(xì)胞凍存
1.將細(xì)胞消化下來,移入離心管離心,棄上清
2.準(zhǔn)備凍存液比例:50%FBS+40%培養(yǎng)基+10%DMSO(現(xiàn)用現(xiàn)配)
3.加1.5凍存液在離心管中,將細(xì)胞吹打均勻,移入凍存管內(nèi).
放入-20度冰箱2-4小時后.再放入-80度冰箱過夜,第二天放入液氮罐保存.

 

,體內(nèi)、外細(xì)胞的差異和分化:

1、差異:細(xì)胞離體后,失去了神經(jīng)體液的調(diào)節(jié)和細(xì)胞間的相互影響,生活在缺乏動態(tài)平衡相對穩(wěn)定環(huán)境,日久天長,易發(fā)生如下變化:分化現(xiàn)象減弱;形態(tài)功能趨于單一化或生存一定時間后衰退死亡;或發(fā)生轉(zhuǎn)化獲得不死性,變成可無限生長的連續(xù)細(xì)胞系或惡性細(xì)胞系。因此,培養(yǎng)中的細(xì)胞可視為一種在特定的條件下的細(xì)胞群體,它們既保持著與體內(nèi)細(xì)胞相同的基本結(jié)構(gòu)和功能,也有一些不同于體內(nèi)細(xì)胞的性狀。實際上從細(xì)胞一旦被置于體外培養(yǎng)后,這種差異就開始發(fā)生了。

2、分化:體外培養(yǎng)的細(xì)胞分化能力并未*喪失,只是環(huán)境的改變,細(xì)胞分化的表現(xiàn)和在體內(nèi)不同。細(xì)胞是否表現(xiàn)分化,關(guān)鍵在于是否存在使細(xì)胞分化的條件,如Friend細(xì)胞(小鼠紅白血病細(xì)胞)在一定的因素作用下可以合成血紅蛋白,血管內(nèi)皮細(xì)胞在類似基膜物質(zhì)底物上培養(yǎng)時能長成血管狀結(jié)構(gòu),雜交瘤細(xì)胞能產(chǎn)生特異的單克隆抗體,這些均屬于細(xì)胞分化行為。

注意事項

1. 收到細(xì)胞后,若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染,請立即與我們。

2. 所有動物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性,必須在二級生物安全臺內(nèi)操作,并請注意防護,所有廢液及接觸過此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。

 

本公司的細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程,供參考
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備DMEM培養(yǎng)基(DMEM,GIBCO,貨號11965-092),90%;胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
1.棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2.加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3ml此細(xì)胞的培養(yǎng)基終止消化。
3.輕輕吹打后吸出,移入15ml離心管中,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)液后吹勻。
4.移入到事先準(zhǔn)備好的含有5ml培養(yǎng)基的T-25培養(yǎng)瓶中或含有14ml培養(yǎng)基的T-75培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)。
3)細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時,可進行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時,先要消化處理并進行細(xì)胞計數(shù)。消化方法按照細(xì)胞傳代方法的1-3步驟進行,zui后的重懸液使用血清。懸浮細(xì)胞直接計數(shù)后離心,用血清重懸浮,加DMSO至zui終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻,按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中。本公司按每個凍存管細(xì)胞數(shù)目大于1X106個細(xì)胞凍存。

傳代時間:2-3天 3-5天

傳代比例:1:2~1:3  1:1~1:2

細(xì)胞活力:95%(Viability by Trypan Blue Exclusion)

細(xì)胞實驗安全性:所有細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性,必須在二級生物安全臺內(nèi)操作,并請注意防護,所有廢液及接觸過此細(xì)胞的器皿需高壓滅菌后方能丟棄。收到細(xì)胞后,在倒置鏡下(是在4X物鏡)觀察整個細(xì)胞生長情況。

研盟生物其他優(yōu)質(zhì)產(chǎn)品:

phospho-VAV1 (Tyr160) 磷酸化鳥苷酸轉(zhuǎn)換因子VAV1抗體
phospho-VAV1 (Tyr174) 磷酸化鳥苷酸轉(zhuǎn)換因子VAV1抗體
phospho-P53(Thr55) 磷酸化腫瘤抑制基因P53抗體
Claudin 14 緊密連接蛋白14抗體
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TRPC6 瞬時受體電位離子通道蛋白6抗體
MAVS 線粒體抗病毒信號MAVS蛋白抗體
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GNMT *-N-甲基轉(zhuǎn)移酶
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關(guān)鍵詞:培養(yǎng)箱 顯微鏡
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