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上海研盟生物科技有限公司
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上海研盟生物科技有限公司優質提供“人膀胱癌抗原(UBC)ELISA試劑盒",規格48T/96T,提供免費代測服務,有任何質量問題或是檢測不出實驗結果均可免費退換,:.
供應的種屬有:人、大鼠、小鼠、兔子、豬、植物等ELISA試劑盒
1、產品種類齊全、質量可靠、*、靈敏度高、效果穩定、易保存、操作簡單。
2、免費提供產品報價、實驗原理、產品用途及說明書。
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【友情提示】:產品價格與說明書請添加: 在線詢價,索要說明書;
產品介紹:
英文名稱:Human urinary bladder cancer antigen,UBC Elisa Kit
中文名稱:人膀胱癌抗原(UBC)ELISA試劑盒
貨號:BYS102375B
報價::
種屬:人
規格:96T/Kit(8*12 strips)、48T/Kit(8*6 strips)
檢測方法:雙抗夾心法、雙抗體一步夾心法
用途:本試劑盒用于體外定量檢測血清、血漿、組織勻漿及相關液體樣本中待測物質的含量。
有效期:6個月
保存條件:2-8℃
操作步驟
方法一 用于檢測未知抗原的雙抗體夾心法:
1. 包被:用0.05M PH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質含量為1~10μg/ml。在每個聚苯乙烯板的反應孔中加0.1ml,4℃過夜。次日,棄去孔內溶液,用洗滌緩沖液洗3次,每次3分鐘。(簡稱洗滌,下同)。
2. 加樣:加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應孔中,置37℃孵育1小時。然后洗滌。(同時做空白孔,陰性對照孔及陽性對照孔)。
3. 加酶標抗體:于各反應孔中,加入新鮮稀釋的酶標抗體(經滴定后的稀釋度)0.1ml。37℃孵育0.5~1小時,洗滌。
4. 加底物液顯色:于各反應孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃10~30分鐘。
5. 終止反應:于各反應孔中加入2M硫酸0.05ml。
6. 結果判定:可于白色背景上,直接用肉眼觀察結果:反應孔內顏色越深,陽性程度越強,陰性反應為無色或極淺,依據所呈顏色的深淺,以“ "、“-"號表示。也可測O·D值:在ELISA檢測儀上,于450nm(若以ABTS顯色,則410nm)處,以空白對照孔調零后測各孔O·D值,若大于規定的陰性對照OD值的2.1倍,即為陽性。
方法二 用于檢測未知抗體的間接法:
用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1~10μg/ml,每孔加0.1ml,4℃過夜。次日洗滌3次。加一定稀釋的待檢樣品(未知抗體)0.1ml于上述已包被之反應孔中,置37℃孵育1小時,洗滌。(同時做空白、陰性及陽性孔對照)于反應孔中,加入新鮮稀釋的酶標第二抗體(抗抗體)0.1ml,37℃孵育30-60分鐘,洗滌,zui后一遍用DDW洗滌。其余步驟同“雙抗體夾心法"的4、5、6。
人膀胱癌抗原(UBC)ELISA試劑盒檢測影響因素分析如下:
一、標本的影響:溶血標本及混有紅細胞的血清采用ELISA法檢測易產生假陽性??赡苁侨苎逯泻羞^氧化酶物質(紅細胞或血紅蛋白中的亞鐵血紅素),在洗滌過程中往往難以*洗脫,它可使H2O2釋放出原生態氧(O),從而催化底物四甲基聯苯胺生成可溶性的有色物質,即顯藍色,產生假陽性[2]。所以嚴重溶血標本禁用。 標本受細菌污染。因菌體中可能含有內源性辣根過氧化物酶,因此,被細菌污染的標本同溶血標本一樣,亦可產生非特異性顯色而干擾測定結果。 標本保存不當。在冰箱中保存過久的標本,在間接法ELISA測定中會導致本底過深、造成假陽性;為克服上述干擾,ELISA試劑盒測定的血清標本宜為新鮮采集;如不能立即測定,5 d內測定的血清標本可存放于4℃,1周后測定的血清標本應低溫凍存;凍存后融解的標本,蛋白質局部濃縮,分布不均,應充分混合后再測定,但混勻時應輕柔,不可強烈振蕩。 塑料試管能吸附抗原物質,樣本久置在塑料管內會使樣本內抗原含量下降造成假陰性。使用真空*;并使用非抗凝標本,肝素抗凝血漿會增加OD值,EDTA、酶抑制劑(如NaN3)可抑制ELISA系統中辣根過氧化物酶活性。 標本凝固不全。 在工作中,有時為了爭取時間快速檢測,常在血液還未開始凝固時即強行離心分離血清,使血清中仍殘留部分纖維蛋白原,在ELISA測定過程中可以形成肉眼可見的纖維蛋白塊,易造成假陽性結果;因此血液標本采集后必須使其充分凝固后再分離血清。
二、 試劑影響 ELISA試劑盒檢測試劑廠家較多;不同廠家出產的試劑
靈敏度與特異性存在一定的差別,使用質劣的試劑必然導致結果的假陽性或假陰性。因此,選擇高質量的上海研盟生物科技有限公司的ELISA試劑盒是保證結果準確的關鍵之一。
三、操作技術的影響:吸量不準確,直接影響檢測結果。因此加樣器也要經常清洗,定期校準。
溫育影響:抗原抗體結合及酶促反應對溫度有嚴格要求,酶標板周圍與內部孔升降溫速率不同,造成周邊與內部孔結果差異;干浴與水浴存在明顯的差異,盡可能使用水浴,并要求固相板放入水中,減少受熱不均,貼密封膜,防止污物浸入。
加樣次序影響:有時我們在加樣過程中,常常會遇到個別標本未離心等情況,為了節約時間,往往這時我們會先加酶結合物,然后等標本分離好后再加標本,這樣,竟常常會造成HBeAb和HBcAb的假陰性。因為HBeAb和HBcAb都是競爭抑制法,先加入酶標記的抗體,首先與固相載體上的抗原結合,待加入顯色劑后,因酶的存在而顯色,故呈陰性[3]。
綜上所述,對臨床檢驗ELISA測定中出現的假陽性或假陰性結果,要從多方面進行分析除試劑因素和操作因素之外,更多的應從標本因素方面進行分析,并采取相應措施排除干擾作用。
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