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上海研盟生物科技有限公司
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更新時間：2017-11-15 09:04:42瀏覽次數(shù)：141次
聯(lián)系我時，請告知來自 環(huán)保在線“Anti-Thy-1抗體,CD90抗體"2A抗體規(guī)格0.1ml、0.2ml、1ml，抗體產(chǎn)品有效期一年，質(zhì)保三個月，質(zhì)保期內(nèi)出現(xiàn)任何質(zhì)量問題或是出不了實驗結(jié)果均可免費退換：
上海研盟生物科技有限公司Anti-Thy-1抗體,CD90抗體*，主要應(yīng)用于WB、IHC、IF、ELISA、流式細胞術(shù)等實驗中。說明書隨貨發(fā)送，您也可以直接我司在線客服索取。客服
簡單介紹：
中文名稱：CD90抗體
英文名稱：Anti-Thy-1
產(chǎn)品編號：byk-0778R
產(chǎn)品別名：CD90 / Thy1; CD7; CD90; CD90 antigen; CDw90; FLJ33325; MGC128895; T25; Theta antigen; Thy-1; Thy 1; Thy 1 cell surface antigen; Thy 1 membrane glycoprotein; Thy 1 membrane glycoprotein precursor; Thy 1.2; Thy-1 T-cell antigen; Thy1 antigen; Thy1 T cell antigen; Thy1.1; Thy1.2; Thymus cell antigen 1, theta; THY1_RAT; THY1_HUMAN.
產(chǎn)品用途：科研實驗
產(chǎn)品價格：請報價
說明書：請?zhí)砑涌头苯铀魅?/p>
抗體來源：該指標有兩種產(chǎn)品，一種是兔來源抗體，一種是鼠來源抗體
克隆類型：兔來源為多克隆抗體，鼠來源單克隆抗體
交叉反應(yīng)：請索取說明書查看
性 狀：Lyophilized or Liquid
濃 度：1mg/1ml
亞 型:IgG
純化方法: affinity purified by Protein A
儲 存 液: 0.01M TBS(pH7.4) with 1% BSA, 0.03% Proclin300 and 50% Glycerol
保存條件: Store at -20 °C for one year. Avoid repeated freeze/thaw cycles. The lyophilized antibody is stable at room temperature for at least one month and for greater than a year when kept at -20°C. When reconstituted in sterile pH 7.4 0.01M PBS or diluent of antibody the antibody is stable for at least two weeks at 2-4 °C.
Anti-Thy-1抗體,CD90抗體產(chǎn)品介紹：Thy-1 or CD90 (Cluster of Differentiation 90) is a 25–37 kDa heavily N-glycosylated, glycophosphatidylinositol (GPI) anchored conserved cell surface protein with a single V-like immunoglobulin domain, originally discovered as a thymocyte antigen. Thy-1can be used as a marker for a variety of stem cells and for the axonal processes of mature neurons. Structural study of Thy-1 lead to the foundation of the Immunoglobulin superfamily, of which it is the smallest member, and led to some of the initial biochemical description and characterization of a vertebrate GPI anchor and also the first demonstration of tissue specific differential glycosylation.
Western Blotting 具體實驗步驟
Western，也稱Western blot、Western blotting、Western 印跡，是用抗體檢測蛋白的重要方法之一。
Western可以參考如下步驟進行操作：
1、收集蛋白樣品(Protein sample preparation)
可以使用適當?shù)牧呀庖毫呀赓N壁細胞、懸浮細胞或組織樣品。對于某些特定的亞細胞組份蛋白，例如細胞核蛋白、細胞漿蛋白、線粒體蛋白等，可以參考相關(guān)文獻提取這些亞細胞組份蛋白，也可以使用試劑盒進行抽提。
收集完蛋白樣品后，為確保每個蛋白樣品的上樣量*，需要測定每個蛋白樣品的蛋白濃度。根據(jù)所使用的裂解液的不同，需要采用適當?shù)牡鞍诐舛葴y定方法。因為不同的蛋白濃度測定方法對于一些去垢劑和還原劑等的兼容性差別很大。
2、電泳(Electrophoresis)
（1）、SDS-PAGE凝膠配制
SDS-PAGE凝膠可以參考一些文獻資料進行配制，也可以使用博研生物生產(chǎn)的SDS-PAGE凝膠配制試劑盒。該試劑盒提供了除水和配膠器具外的所有試劑以及配制各種濃度SDS-PAGE的配方。
（2）、樣品處理
在收集的蛋白樣品中加入適量濃縮的SDS-PAGE蛋白上樣緩沖液。例如2X或5X的SDS-PAGE蛋白上樣緩沖液。使用5X的SDS-PAGE蛋白上樣緩沖液可以減小上樣體積，在相同體積的上樣孔內(nèi)可以上樣更多的蛋白樣品。5X的SDS-PAGE蛋白上樣緩沖液可以參考相關(guān)文獻資料配制，也可以使用我公司生產(chǎn)的SDS-PAGE蛋白上樣緩沖液(5X) 。100℃或沸水浴加熱3-5分鐘，以充分變性蛋白。
（3）、上樣與電泳
冷卻到室溫后，把蛋白樣品直接上樣到SDS-PAGE膠加樣孔內(nèi)即可。為了便于觀察電泳效果和轉(zhuǎn)膜效果，以及判斷蛋白分子量大小，使用預(yù)染蛋白質(zhì)分子量標準。
電泳時通常*在上層膠時使用低電壓恒壓電泳，而在溴酚藍進入下層膠時使用高電壓恒壓電泳。對于Bio-Rad的標準電泳裝置或類似電泳裝置，低電壓可以設(shè)置在80-100V，高電壓可以設(shè)置在120V左右。SDS-PAGE可以采用普通的電泳儀就可以滿足要求。為了電泳方便起見，也可以采用整個SDS-PAGE過程恒壓的方式，通常把電壓設(shè)置在100V，然后設(shè)定定時時間為90－120分鐘。設(shè)置定時可以避免經(jīng)常發(fā)生的電泳過頭。
通常電泳時溴酚藍到達膠的底端處附近即可停止電泳，或者可以根據(jù)預(yù)染蛋白質(zhì)分子量標準的電泳情況，預(yù)計目的蛋白已經(jīng)被適當分離后即可停止電泳。
3、轉(zhuǎn)膜(Transfer)
我們*在Western實驗中選用PVDF膜。硝酸纖維素膜(NC膜)或PVDF膜（二氟化樹脂膜膜孔徑：0.45um)也可以使用，但硝酸纖維素膜比較脆，在操作過程中特別是用鑷子夾取等過程中容易裂開。膜的使用請參考生產(chǎn)商的*使用步驟。
通常如果使用Bio-Rad的標準濕式轉(zhuǎn)膜裝置，可以設(shè)定轉(zhuǎn)膜電壓120V，轉(zhuǎn)膜時間為30-60分鐘。具體的轉(zhuǎn)膜時間要根據(jù)目的蛋白的大小而定，目的蛋白的分子量越大，需要的轉(zhuǎn)膜時間越長，目的蛋白的分子量越小，需要的轉(zhuǎn)膜時間越短。
在轉(zhuǎn)膜過程中，特別是高電流快速轉(zhuǎn)膜時，通常會有非常嚴重的發(fā)熱現(xiàn)象，把轉(zhuǎn)膜槽放置在冰浴中進行轉(zhuǎn)膜。轉(zhuǎn)膜的效果可以觀察所使用的預(yù)染蛋白質(zhì)分子量標準，通常分子量zui大的1-2條帶較難全部轉(zhuǎn)到膜上。轉(zhuǎn)膜的效果也可以用麗春紅染色液對膜進行染色，以觀察實際的轉(zhuǎn)膜效果。也可以用考馬斯亮藍快速染色液對完成轉(zhuǎn)膜的SDS-PAGE膠進行染色，以觀察蛋白的殘留情況。
4、封閉(Blocking)
轉(zhuǎn)膜完畢后，立即把蛋白膜放置到預(yù)先準備好的Western洗滌液中，漂洗1-2分鐘，以洗去膜上的轉(zhuǎn)膜液。從轉(zhuǎn)膜完畢后所有的步驟，一定要注意膜的保濕，避免膜的干燥，否則極易產(chǎn)生較高的背景。
用微型臺式真空泵吸盡洗滌液，加入Western封閉液，在搖床上緩慢搖動,室溫封閉60分鐘。對于一些背景較高的抗體，可以在4℃ 封閉過夜。
5、一抗孵育(Primary antibody incubation)
參考一抗的說明書，按照適當比例用Western一抗稀釋液稀釋一抗。
用微型臺式真空泵吸盡封閉液，立即加入稀釋好的一抗，室溫或4℃在側(cè)擺搖床上緩慢搖動孵育一小時。如果一抗孵育一小時效果不佳，可以在4℃緩慢搖動孵育過夜。回收一抗。加入Western洗滌液，在側(cè)擺搖床上緩慢搖動洗滌5-10分鐘。吸盡洗滌液后，再加入洗滌液，洗滌5-10分鐘。共洗滌3次。如果結(jié)果背景較高可以適當延長洗滌時間并增加洗滌次數(shù)。
6、二抗孵育(Secondary antibody inucubation)
參考二抗的說明書，按照適當比例用Western二抗稀釋液稀釋辣根過氧化物酶(HRP)標記的二抗。
用微型臺式真空泵吸盡洗滌液，立即加入稀釋好的二抗，室溫或4℃在側(cè)擺搖床上緩慢搖動孵育一小時。回收二抗，加入Western洗滌液，在側(cè)擺搖床上緩慢搖動洗滌5-10分鐘。吸盡洗滌液后，再加入洗滌液，洗滌5-10分鐘。共洗滌3次。如果結(jié)果背景較高可以適當延長洗滌時間并增加洗滌次數(shù)。
7、蛋白檢測(Detection of proteins)
參考相關(guān)說明書，使用BeyoECL, Western 熒光檢測試劑等ECL類試劑來檢測蛋白。
洗片時可以使用X光片自動洗片機。如果沒有自動洗片機，可以用顯影定影試劑盒自行配制顯影液和定影液進行手工洗片。
8、膜的重復(fù)利用(Membrane recovery)
如果蛋白樣品非常寶貴，可以使用Western一抗二抗去除液處理蛋白膜，以重復(fù)利用蛋白膜。
相關(guān)產(chǎn)品：
TFPI-2 (tissue factor pathway inhibitor-2) 組織因子途徑抑制劑-2抗體
TGF-α (Ttansforming Growth Factor –α) 轉(zhuǎn)移生長因子–α抗體
TGF-β1（Ttansforming Growth Factor –β1） 轉(zhuǎn)化生長因子β1抗體
TIEG1/KLF10（TGF-beta inducible early response gene 1） TGF-β誘導(dǎo)早期應(yīng)答基因1抗體
TGF-β2 （Ttansforming Growth Factor –β2） 轉(zhuǎn)移生長因子–β2抗體
TGF-β3/TGF beta 3 轉(zhuǎn)移生長因子–β3抗體
TGF-βR1/ALK (TGF-beta receptor type I) 轉(zhuǎn)移生長因子–β受體1抗體
TGF-βR 2（Transforming growth factor β receptor 2 ） 轉(zhuǎn)移生長因子–β受體2抗體
TGF-βR 3（Transforming growth factor β receptor 3） 轉(zhuǎn)移生長因子–β受體3抗體
TGM3(Transglutaminase 3) 轉(zhuǎn)谷氨酰酶3抗體
Thioster-containing protein 1（-Anopheles stephensi protein 1） 按蚊抗體/按蚊硫含蛋白質(zhì)-1抗體
Thioredoxin 1(ERdj5) 硫氧還蛋白抗體
thrombin Ⅱ *Ⅱ抗體
phospho-p38 ERK/MAPK14 (pThr180/pTyr182) 磷酸化-絲裂原活化蛋白激酶p38抗體
Tie1/JTK14( tyrosine kinase with immunoglobulin-like and EGF-like domains 1) 上皮生長因子樣域*激酶1抗體
TYM-1/CD90 CD90抗體
CD93/C1qrp(Complement component C1q receptor) CD93抗體
CD94/KLRD1(Killer cell lectin-like receptor subfamily D member 1) NK細胞表面抑制性受體CD94抗體
CD97(Leukocyte antigen CD97) CD97抗體
CD99/E2 antigen(T-cell surface glycoprotein E2) CD99抗體
TYMmosin α-1 * α-1抗體
TYMroxine 4/T4/Tg4 甲狀腺素T4抗體
Tie2（Porcine tyrosine kinase with immunoglobulin-like and EGF-like domains 2） 上皮生長因子樣域*激酶2抗體
RARRES1/TIG1(Retinoic acid receptor responder protein 1) *受體應(yīng)答蛋白1抗體
Rarres2/TIG2/Chemerin(Retinoic acid receptor responder protein 2) *受體應(yīng)答蛋白2抗體
Rarres3/TIG3/Chemerin(Retinoic acid receptor responder protein 3) *受體應(yīng)答蛋白3抗體
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