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細胞系說明書

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更新時間：2017-10-27 09:22:46瀏覽次數：1026次

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產品簡介

細胞系說明書 L6565（小鼠白血病克隆細胞系）的處理方法：1. 先從外包裝盒拿出離心管，在離心管表面噴一層酒精，并小心去掉封口膜；2. 將離心管中的細胞在超凈工作臺內取出一部分進行細胞計數（詳見細胞凍存）。3. 如細胞密度小于3×106/ml，可直接將離心管中的細胞轉移到T25瓶中，置于37°C，5% CO2的培養箱中靜置培養。

詳細介紹

細胞系說明書

細胞名稱：L6565 小鼠白血病克隆細胞系

培養條件：RPMI-1640+10% FBS

形態：懸浮；淋巴母細胞樣

背景：L6565細胞源自L6565白血病小鼠的脾細胞胰懸液。染色體數從38到144不等。電鏡觀察證明L6565克隆細胞核邊界清晰，細胞質中oragnalles和A類C類病毒顆粒豐富。 c-myc和c-fos過量表達。 L6565細胞克隆是一株含youRNA病毒的淋巴細胞白血病干細胞。

細胞系說明書

L6565(小鼠白血病克隆細胞系)“一代”指從細胞接種到分離再培養的一段期間，與細胞世代或倍增不同。在一代中，細胞培增3～6次。細胞傳代后，一般經過三個階段：游離期、指數增生期和停止期。常用細胞分列指數表示細胞增殖的旺盛程度，即細胞群的分列相數／100個細胞。一般細胞分列指數介于0.2％～0.5％，腫瘤細胞可達3～5％。接種2～3天分列增殖旺盛，是活力時期，稱指數增生期(對數生長期)，適宜進行各種試驗。

formazan結晶的生成量僅與活L6565(小鼠白血病克隆細胞系)數目成正比（死細胞中琥珀酸脫氫酶消失，不能將MTT還原）。還原生成的formazan結晶可在含50%的N,N-二甲基甲酰胺和20%的十二甲基磺酸鈉（pH 4.7）的MTT溶解液中溶解，利用酶標儀測定490 nm處的光密度OD值，以反映出活細胞數目。也可以用DMSO來溶解。MTT粉末和溶液保存時都需要避光，用鋁箔紙包好就可以。實驗的時候一般關閉超凈臺上的日光燈來避光，覺得這樣比較好。

1.接種：用含10％胎小牛血清得培養液配成單個細胞懸液，以每孔1000－10000個接種到96孔板，每孔體積200ul.

2.L6565(小鼠白血病克隆細胞系)培養：同一般培養條件，培養3－5天（可根據試驗目的和要求決定培養時間）。

3.呈色：培養3－5天后，每孔加MTT溶液（5mg/ml用PBS 配)20ul.

繼續孵育4小時，終止培養，小心吸棄孔內培養上清液，對于懸浮需要離心后再吸棄孔內培養上清液。每孔加150ul DMSO，振蕩10分鐘，使結晶物充分融解。

4.比色：選擇490nm波長，在酶聯免疫監測儀上測定各孔光吸收值，記錄結果，以時間為橫坐標，吸光值為縱坐標繪制L6565(小鼠白血病克隆細胞系)生長曲線。

關鍵詞：酶標儀