一、原理

其基本原理可概括為：將特異的抗原-抗體免疫學反應和酶學催化反應相結合，以酶促反應的放大作用來顯示初級免疫學反應。因此，酶免疫技術一般均有兩部分組成，即一次或數次免疫學反應和一次酶促反應。抗原、抗體發生特異結合過程中，設法引入酶結合物，如酶標記的抗抗體，然后加入酶的底物，在酶催化下生成有色產物，反映出被測定抗原或抗體的量。

二、操作流程、類型及特點

1、操作流程：

檢測抗體多用間接型elisa。以純化抗原包被載體，經4℃隔夜，以無關蛋白封閉至少2小時以上，加入待測樣品，室溫孵育1小時，洗滌干凈后加酶標抗體，再經室溫孵育、洗滌后，以底物顯色，顯色到一定程度終止反應，在酶標儀上讀結果或以肉眼判斷。

2、類型：elisa具體方法的類型繁多，試劑的標準化問題還未zui后解決，溫育的時間、溫度、洗滌液的種類及洗滌次數等都是影響測定的因素。但參考以上基本過程，無論怎樣變化，均離不開抗原-抗體反應、酶標抗體的免疫學反應及酶催化作用。

3、特點：(1)、敏感性高，可檢出濃度在ug~mg/ml水平；(2)、特異性強；(3)、重復性好；(4)、快速、簡便、廉價。

三、實驗條件

1、固相載體：可作為固相載體的物質很多，如：纖維素、聚丙烯酰胺、聚苯乙烯、聚丙烯、交聯葡聚糖、玻璃、硅橡膠、瓊脂糖凝膠等?？梢愿鞣N形式出現；試管、微量反應板凹孔、小珠等。zui常用的是聚苯乙烯制品，其吸附性。固相包被的機制一般不外乎物理吸附和共價交聯，

2、封閉：以無關蛋白占據載體上未被包被的空隙，常用的封閉液是1%牛血清白蛋白或10%小牛血清。

3、待測樣品：稀釋度要合適，濃度太大會發生非特異性吸附造成假陽性，過分稀釋會影響抗原-抗體之間的免疫學反應。選擇zui適稀釋度，在實驗體系中取光密度在1.0左右的稀釋度為宜。

4、酶結合物：使用高質量的酶結合物是elisa成功的關鍵。

四、注意事項

酶聯免疫技術的試劑標準化問題尚未完*，溫育過程的時間、溫度、洗滌液的種類及洗滌次數都是影響zui后測定的因素。為使實驗得到滿意的結果，在操作過程中應作到

1、每次試驗都必須設陽性和陰性對照。

2、封閉要*。

3、洗滌要測定。