人白介素1ELISA檢測試劑盒使用首先確定本次檢測所需的已包被抗體的酶標板孔數目，并增加 1 孔作為 TMB 空白顯色孔。
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人白介素1ELISA檢測試劑盒實驗測定具體步驟：
1．確定本次檢測所需的已包被抗體的酶標板孔數目，并增加 1 孔作為 TMB 空白顯色孔。 總數=樣品數+9；做雙份檢測時×2。其余重包裝好放如冰箱中。
2．將標準品各 0.1ml 依次加入一排 7 孔中，1 孔只加樣品稀釋液的作為零孔。對于血清、體液、 組織勻漿或細胞培養上清，直接加已用樣品稀釋液稀釋的樣品 100μ ι 。
3．酶標板加上蓋，37℃反應 90 分鐘。
4．反應后用自動洗板機吸去酶標板內的液體；或甩去酶標板內液體，再對著吸水紙拍幾下。 不洗。
5．將準備好的生物素抗體工作液按每孔 0.1ml 依次加入。（TMB 空白顯色孔除 外）。37℃反應 60 分鐘。
6． 0.01M TBS 或 0.01M PBS 洗滌 3 次，每次浸泡 1 分鐘左右。
7．將準備好的 ABC 工作液按每孔 0.1ml 依次加入（TMB 空白顯色孔除外）。37℃反應 30 分鐘。
8． 0.01M TBS 或 0.01M PBS 洗滌 5 次，每次浸泡 1-2 分鐘左右。
9．按每孔 90μ ι 依次加入已在 37℃平衡 30 分鐘的 TMB 顯色液，37℃避光反應 20-25 分鐘 （注意：顯色時間供參考，因用戶實驗室條件差異，顯色時間會有所不同。此時肉眼可 見標準品的前 3-4 孔有明顯的梯度藍色，后 3-4 孔差別不明顯）。
10．按每孔 0.1ml 依次加入 TMB 終止液，此時藍色立轉黃色。
11．用酶標儀在 450nm 測定 O.D.值。
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