睪酮(T) ELISA試劑盒（人、大鼠、小鼠、兔子等）

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睪酮(T) ELISA試劑盒（人、大鼠、小鼠、兔子等）需自備試劑和器材
1． 標(biāo)準(zhǔn)規(guī)格酶標(biāo)儀。 
2． 自動洗板機(jī)。 
3.  37℃恒溫箱。
4． 系列可調(diào)節(jié)移液器及吸頭，一次檢測樣品較多時，用多通道移液器。 
5． 干凈的試管和 Eppendof 管。 
6． 使用中性 PBS 或 TBS 作為洗滌液。0.01M TBS   配法為：1000ml H2O 中加 Tris 1.2g, NaCl 8.5g; 純乙酸 450μ l 或濃鹽酸 700μ l 左右調(diào)節(jié) pH 值(7.2-7.6)。 
0.01 M PBS（pH7.2-7.6）  配法：1000ml 蒸餾水中加氯化鈉 8.5g, Na2HPO4 1.4g, NaH2PO4 0.2g。如果用的是含水磷酸鹽，應(yīng)加上分子式中水的含量。
9.  蒸餾水
10.  吸水紙

睪酮(T) ELISA試劑盒（人、大鼠、小鼠、兔子等）注意事項(xiàng)
1.試劑準(zhǔn)備：所有試劑都必須在使用前達(dá)到室溫，使用后請立即按照說明書要求保存。實(shí)驗(yàn)操作中必須使用一次性吸頭，避免交叉污染。
2．加樣：加樣時，要控制加樣速度，避免*孔與zui后一孔之見的時間間隔過大，否則將會導(dǎo)致不同的預(yù)孵育時間，從而影響實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性以及重復(fù)性；一般加樣時間控制在10分鐘內(nèi)，如果樣本數(shù)量過多，可使用多道移液器。
3.孵育：樣品要在密閉的容器內(nèi)進(jìn)行孵育，嚴(yán)格按照說明書上規(guī)定的孵育時間和溫度進(jìn)行。
4.洗滌：洗滌過程中反應(yīng)孔中的殘留的洗滌液應(yīng)在濾紙上充分拍干，同時要消除板底殘留的液體和手指痕跡，避免影響zui后的酶標(biāo)儀讀數(shù)。
5.反應(yīng)時間的控制：加入底物后請定時觀察反應(yīng)孔的顏色變化(比如，10分鐘左右)，如果顏色較深，請?zhí)崆凹尤虢K止液終止反應(yīng)。
6.建議實(shí)驗(yàn)前預(yù)測樣品含量，如樣品濃度過高，應(yīng)對樣品進(jìn)行稀釋，計(jì)算結(jié)果時乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。
7.建議使用本試劑盒時先做預(yù)實(shí)驗(yàn)(即先做標(biāo)準(zhǔn)曲線，試用幾個標(biāo)本)，如果對本試劑盒有任何疑問，可和所購經(jīng)銷商，如果因運(yùn)輸過程導(dǎo)致試劑盒失效，可要求調(diào)換，但概不承擔(dān)產(chǎn)品本身以外的任何損失。

睪酮(T) ELISA試劑盒（人、大鼠、小鼠、兔子等）操作步驟
1. 取出試劑盒，于室溫(20-25℃)放置15-30分鐘。實(shí)驗(yàn)過程應(yīng)在室溫(20-25℃)內(nèi)進(jìn)行。
2. 取出酶標(biāo)板，按照標(biāo)準(zhǔn)品的次序分別加入50μl的標(biāo)準(zhǔn)品溶液于空白微孔中。
3. 空白微孔中加入50μl的樣品，空白對照加入50μl的蒸餾水；
4. 在樣品孔中加入10μl的生物素；(不含空白對照孔,切忌：生物素只加樣品孔！)
5. 在各孔中加入100μl的酶標(biāo)記溶液；(不含空白對照孔)
6. 將酶標(biāo)板用封口膠密封后，37℃孵育反應(yīng) 1小時；(在孵育箱中保持穩(wěn)定的溫度與濕度)
7. 充分清洗酶標(biāo)板3-5次，保持各孔有充足的水壓；(濃縮洗滌液以1：100的比例與蒸餾水稀釋)
8. 酶標(biāo)板洗滌后用吸水紙*拍干；
9. 各孔加入顯色劑A、B液各50μl；(不含空白對照孔)
10. 20-25℃下避光反應(yīng)15分鐘；
11.各孔加入50μl終止液，終止反應(yīng)；

結(jié)果判斷
1. 30分鐘內(nèi)在波長450nm的酶標(biāo)儀上讀取各孔的OD值；
2. 以O(shè)D值為縱坐標(biāo)，以標(biāo)準(zhǔn)品的濃度為橫坐標(biāo)，繪制曲線圖；
3. 根據(jù)樣品的OD值查找對應(yīng)的濃度范圍；

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