通用型低密度脂蛋白膽固醇（LDL-Cholesterol）均相法酶連續循環比色法

定量檢測試劑盒產品說明書

主要用途

通用型低密度脂蛋白膽固醇（LDL-Cholesterol）均相法酶連續循環比色法定量檢測試劑是一種旨在使用特定活性劑的情況下，通過膽固醇酯酶、膽固醇氧化酶和過氧化酶的酶連續反應系統中產生的過氧化氫（H2O2），與氨基安替比林反應，生成粉紅色的醌亞胺后吸光峰值的變化，即采用比色法來測定樣品中低密度脂蛋白膽固醇濃度的而經典的技術方法。該技術經過精心改良第三代均相（homogenous）直接檢測技術、成功實驗證明的。其適用于各種細胞、組織、血液、體液（動物、人體等）樣品中低密度脂蛋白膽固醇的濃度檢測。產品嚴格無菌，即到即用，操作簡捷，性能穩定，檢測敏感。

技術背景

膽固醇（cholesterol）是一類稱之為固醇類（sterols）或聚類異戊二烯（polyisoprenoid）或三萜皂甙元（triterpene）的多環化合物（polycyclic compound）。其分子式為cholest-5-en-3β-ol。膽固醇以游離（free form）和酯化結合（ester）兩種形式廣泛存在于所有動物體內，主要以游離形式循環于血液中，以脂化形式傳運和貯存。其中脂蛋白在體內血循環系統起著攜帶、轉運和儲存膽固醇的重要功能。根據與不同脂蛋白的結合，定義膽固醇為好（good）和壞（bad）膽固醇。脂蛋白分成五種類型：乳糜粒脂蛋白（Chylomicrons）、極低密度脂蛋白（very low density lipoprotein；VLDL）、低密度脂蛋白（low density lipoprotein；LDL）、中介密度脂蛋白（intermediate density lipoprotein；IDL）、和高密度脂蛋白（high density lipoprotein；HDL）。其中低密度脂蛋白由異源性和多分散性（polydisperse）顆粒組成，水化比重為1.006至1.063，是體內含量zui多的膽固醇脂蛋白組分，主要功能在于在血液循環中轉運70%脂類物質（例如甘油三酯），或從周邊細胞轉運膽固醇到肝臟。一旦含量增加，其患有動脈粥樣硬化、冠狀動脈疾病的風險增加，并可以用于預測心臟疾病的發生。基于干擾性乳糜粒脂蛋白、極低密度脂蛋白、高密度脂蛋白酯化膽固醇（cholesterel ester）等受到特定表面活性劑Emulgen溶解，由膽固醇酯酶（cholesterol esterase）水解，轉化為游離膽固醇，進一步由膽固醇氧化酶（cholesterol oxidase）氧化產生過氧化氫（H2O2），zui后在過氧化氫酶（catalase）的催化下，得到去除（步驟一）。進而剩下的完整低密度脂蛋白膽固醇經過特定去垢劑處理釋放，繼續與膽固醇酯酶和膽固醇氧化酶反應，在過氧化酶（peroxidase）的催化下，過氧化氫與氨基安替比林（4-amino-antipyrine；AAP）反應，生成粉紅色的醌亞胺（quinoneimine）后吸光峰值的變化（波長500nm），來定量測定低密度脂蛋白膽固醇的濃度（步驟二）。其酶連續反應系統為：

步驟一

步驟二

產品內容

緩沖液（Reagent A）  毫升

反應液A（Reagent B）       毫升

反應液B（Reagent C）       毫升

標準液（Reagent D）       微升

產品說明書   1份

保存方式

保存在－20℃冰箱里，反應液B（Reagent C）和標準液（Reagent D）避免光照，有效保證6月

用戶自備

恒溫水槽或培養箱：用于孵育反應

200微升1厘米光徑比色皿或96孔板：用于反應和比色分析的容器

分光光度儀或酶標儀：用于比色分析

實驗步驟

實驗開始前，將－20℃冰箱里的試劑置入冰槽里融化。然后進行下列操作。

• 測定準備

• 準備好待測樣品，置于冰槽里備用
• 設定好酶標儀（溫度為37℃）：波長500nm
• 準備好5個1.5毫升離心管，標記為1至5號管

二、標準樣品測定

• 在96孔板上做好相應標記
• 移取xx微升緩沖液（Reagent A）到相應孔里
• 加入xx微升標準液（Reagent D）
• 加入xx微升反應液B（Reagent C） 
• 輕輕搖動96孔板30秒
• 即刻放進酶標儀檢測：獲得初始吸光讀數（OD）
• 在37℃溫度下孵育2.5分鐘，避免光照
• 即刻放進酶標儀檢測：獲得終點吸光讀數（OD）
• 獲得實際吸光讀數：終點吸光讀數（OD）－初始吸光讀數（OD）

三、樣品測定

• 在96孔板上做好相應標記：待測樣品
• 移取xx微升緩沖液（Reagent A）到相應孔里
• 加入5微升待測樣品
• 加入xx微升反應液A（Reagent B）
• 在37℃溫度下孵育5分鐘
• 加入xx微升反應液B（Reagent C） 
• 輕輕搖動96孔板30秒
• 即刻放進酶標儀檢測：獲得初始吸光讀數（OD）
• 在37℃溫度下孵育2.5分鐘，避免光照
• 即刻放進酶標儀檢測：獲得終點吸光讀數（OD）
• 獲得實際吸光讀數：終點吸光讀數（OD）－初始吸光讀數（OD）
• 計算樣品濃度（毫克/分升）

• 濃度換算方法：

注意事項

• 本產品為20次操作，包括標準液
• 本產品的檢測范圍為1至400毫克/分升
• 本產品適宜于各種自動生化儀檢測
• 操作時，須戴手套
• 建議樣品保存在－70℃冰箱里，如果保存在4℃冰箱里，其穩定性保持1周，－20℃保持3月
• 系統操作過程中，標準液測定只需1次
• 孵育反應完成后即刻進行比色測定
• 樣品比色檢測可以使用分光光度儀和比色皿替代
• 比色測定后，使用比色皿的，須清洗*
• 如果用戶沒有匹配的濾波器，可以使用480nm至520nm之間的任一波長
• 如果待測樣品濃度過高或過低，可以調整樣品濃度
• 膽紅素（大于40毫克/分升）血紅蛋白（大于500毫克/分升）、甘油三酯（大于1000毫克/分升）、抗壞血酸（大于50毫克/分升）等會干擾檢測
• 正常血清低密度脂蛋白膽固醇的含量為小于或等于130毫克/分升（3.367毫摩爾）；高于160毫克/分升（4.144毫摩爾)則具有心血管疾病的風險
• 本公司提供系列脂蛋白膽固醇檢測試劑產品

質量標準

• 本產品經鑒定性能穩定
• 本產品經鑒定檢測敏感