細(xì)菌核糖體（ribosome）分離試劑盒產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)

主要用途

細(xì)菌核糖體（ribosome）分離試劑是一種旨在通過(guò)化學(xué)破膜以及差速超速離心處理方法，分離出完整而純化的70S核糖體組分的而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過(guò)精心研制、成功實(shí)驗(yàn)證明的。適合于各種培養(yǎng)或臨床細(xì)菌菌株核糖體成分的分離。產(chǎn)品即到即用，操作簡(jiǎn)易，性能穩(wěn)定，無(wú)核酶和蛋白酶污染，萃取純度和產(chǎn)量皆高。 

技術(shù)背景

核糖體（ribosome）是一種細(xì)小顆粒的核糖蛋白復(fù)合物（ribonucleoprotein complex），生命細(xì)胞制造蛋白質(zhì)的非膜性結(jié)構(gòu)元素和轉(zhuǎn)譯裝置（translational apparatus），由RNA和蛋白質(zhì)組成，具有多肽轉(zhuǎn)移酶的活性，刺激RNA合成，并調(diào)節(jié)RNA、核糖體自身以及蛋白質(zhì)的生物合成。其分成2個(gè)亞體：大亞體和小亞體。核糖體通過(guò)大亞體結(jié)合轉(zhuǎn)運(yùn)核糖體（tRNA），而小亞體結(jié)合信使RNA（mRNA），然后閱讀RNA提供的信息，轉(zhuǎn)譯（translation）成氨基酸，連接成蛋白分子。真核生物的核糖體位于胞漿（游離核糖體）、線粒體和葉綠體中。其中胞漿核糖體為80S核糖體，由40S小亞體和60S大亞體組成：60S由5S RNA、28S RNA、5.8S亞基和49個(gè)蛋白組成；而40S由18S RNA和33個(gè)蛋白組成。線粒體和葉綠體核糖體與原核生物相似，為70S核糖體，由30S小亞體和50S大亞體組成：50S包括5S、23S RNA和34個(gè)蛋白；30S包括16S RNA和21個(gè)蛋白。細(xì)菌核糖體成為抗菌藥物的靶標(biāo)，其中50%以上抗菌素針對(duì)細(xì)菌核糖體。同時(shí)核糖體高度進(jìn)化保留，成為種系分類(lèi)（phylogenetic classification）的分子標(biāo)志。   

產(chǎn)品內(nèi)容

裂解液（Reagent A）           毫升

保存液（Reagent B）           毫升

產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)              1份

保存方式

保存在－20℃冰箱里，有效保證6月

用戶(hù)自備

50毫升錐形離心管：用于樣品操作的容器

1.5毫升離心管：用于樣品操作和保存的容器

臺(tái)式離心機(jī)：用于樣品操作

超速離心機(jī)：用于樣品操作

超聲儀：用于裂解細(xì)胞

渦旋震蕩儀：用于混勻

實(shí)驗(yàn)步驟

實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前，將試劑盒里的試劑置于冰槽里凍融備用。然后進(jìn)行下列操作。

1． 準(zhǔn)備50毫升細(xì)菌（OD600=0.2或108細(xì)胞/毫升）

2． 轉(zhuǎn)移到50毫升錐形離心管

3． 放進(jìn)臺(tái)式離心機(jī)離心30分鐘，速度為3000g

4． 小心抽去上清液

5． 加入預(yù)冷的xx毫升裂解液（Reagent A）

6． 渦旋震蕩15秒，充分混勻

7． 超聲處理100瓦功率，20秒一次重復(fù)4次

8． 置于冰槽里孵育30分鐘，期間每隔5分鐘渦旋震蕩15秒

9． 放進(jìn)4℃臺(tái)式離心機(jī)離心15分鐘，速度為15000g

10． 小心移取上清液到新的高速離心管

11． 放進(jìn)超速離心機(jī)離心15分鐘，速度為30000g

12． 小心移取上清液到新的高速離心管（注意：可以使用礦物油填滿(mǎn)離心管）

13． 放進(jìn)4℃超速離心機(jī)離心2小時(shí)，速度為100000g

14． 小心取出離心管 

15． 小心抽去上清液

16． 加入500微升或xx毫升保存液（Reagent B），混勻顆粒群

17． 轉(zhuǎn)移到新的1.5毫升離心管

18． （選擇步驟）進(jìn)行核糖體定量測(cè)定 

19． 放進(jìn)－70℃冰箱里保存或置于冰槽里準(zhǔn)備后續(xù)操作

注意事項(xiàng)

1． 本產(chǎn)品為20次操作（5 X 109細(xì)胞/次）  

2． 建議使用足夠的細(xì)菌量

3． 樣品操作均須在4℃或以下?tīng)顟B(tài)下進(jìn)行

4． 操作時(shí)，須無(wú)菌操作，避免污染母液

5． 核糖體定量計(jì)算公式（微克/微升）： A260 ? 11.1

6． 如果進(jìn)行核糖體蛋白萃取，建議使用純化核糖體蛋白質(zhì)萃取試劑盒—HL16041

7． 本公司提供系列核糖體分析技術(shù)產(chǎn)品

質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

1． 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定

2． 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定分離的核糖體維持正常活性

3． 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定不含污染性蛋白酶和核酶