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行業(yè)產(chǎn)品
南京海克爾生物科技有限公司
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閱讀:154發(fā)布時間:2017-10-30
產(chǎn)品簡介:
細(xì)胞凋亡的檢測方法有形態(tài)學(xué)研究方法,生物化學(xué)研究方法,DNA片段化檢測方法,以及TUNEL等標(biāo)記片段化DNA方法,但從細(xì)胞凋亡概念產(chǎn)生的歷史及準(zhǔn)確性方面考慮,使用光學(xué)顯微鏡及電子顯微鏡進(jìn)行的形態(tài)學(xué)觀察是很重要的。
細(xì)胞死亡的檢測方法有用熒光色素染色區(qū)分活細(xì)胞、死細(xì)胞,測定細(xì)胞代謝活性和形態(tài)學(xué)觀察。這些方法都是利用細(xì)胞凋亡這種情況進(jìn)行測定的,因而不一定反應(yīng)實際情況。MTT法是測定線粒體中*酶的活性,反映細(xì)胞數(shù)目的變化,其結(jié)果與細(xì)胞死亡的數(shù)目未必一致。所以,有必要采取多種方法判斷細(xì)胞死亡。
吖啶橙嵌合到雙鏈DNA分子中顯綠色,與DNA單鏈或RNA結(jié)合時發(fā)橙色熒光。EB嵌合到DNA堿基對中間時發(fā)紅色熒光。吖啶橙可透過或細(xì)胞膜,EB不能通過與活細(xì)胞膜具有相同通透性的細(xì)胞膜。 操作步驟(僅供參考):
1.每份樣品中加入試劑(A)及試劑(B)各1ui,混合均勻;
2.500g離心細(xì)胞5min;
3.用PBS重懸細(xì)胞,將細(xì)胞密度調(diào)整為5X105 ~5X106/ml
4.每25ul細(xì)胞懸液中加入試劑(A)和試劑(B)混合液;
5..在潔凈的載玻片上加上5ul細(xì)胞懸液,蓋上蓋玻片,在熒光顯微鏡B域進(jìn)行觀察;
顯綠色熒光的為活細(xì)胞,顯橙色熒光的為死細(xì)胞。
注意事項:
1.用能通過活細(xì)胞與DNA結(jié)合后發(fā)藍(lán)色熒光的Hoechist 33342和只能通過死細(xì)胞與DNA結(jié)合后發(fā)紅色熒光的碘化吡啶(propidium iodide,PI)對細(xì)胞進(jìn)行二重染色的方法也比較常用。
2.為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。
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