半固體瓊脂穿刺法

根據有鞭毛的細菌可以在半固體培養基中游動卻又不能任意游走的現象，觀察細菌生長情況，判定試驗菌是否有運動性。可使用試驗菌能良好生長的培養基，在其中加0.3%~0.6%的瓊脂，（所用的瓊脂量可因牌號不同而異）一般半固體培養基應是放倒試管不流動，而在手上輕輕敲打時瓊脂即破裂為宜。對一般常見細菌可結合葡萄糖氧化發酵試驗觀察運動性。

用直針穿刺接種試驗菌于半固體培養基內，適溫培養。細菌的運動性可用透射光目測。如生長物只生長在穿刺線上，邊緣十分清晰，則表示試驗菌無運動性；如生長物由穿刺線向四周呈云霧狀擴散，其邊緣呈云霧狀，則表示試驗菌株有運動性。對生長快的細菌應培養1天后觀察。如*天不能判定可在第2?3天再觀察。如2~3天時仍不能判定是否有運動性，可延遲5~6天再觀察一次。因為游動力弱的細菌，在半固體培養基中第1-2天中尚不能從穿刺線游開，故需多培養幾天觀察。如試驗菌在半固體培養基中產氣，氣泡會將穿刺線上的生長物的擴散情況，不可誤將不運動的細菌判為有運動性。如試驗菌是好氧細菌，穿刺線上生長物很少，可檢查從培養基表面向下滲入的生長物的情況。

（二）鏡檢法

用顯微鏡檢查細菌細胞是否能游動，可用普通顯微鏡或相差顯微鏡檢查。用普通顯微鏡時光線不宜太強，要適當減弱。檢查時應注意以下幾點：

(1)細菌細胞間有明顯位移者，才能判定為運動性。由于細菌細胞太小，在懸液中有布朗運動，即每個細胞均在原地顫動，彼此的位置關系卻沒改變，切不可將這種現象誤判為具運動性。由于載片與蓋片之間懸液過多，在使用油浸物鏡調焦時，懸液在蓋玻片下流動。這時可看到大批細菌細胞都以同一速度向同一方向運動，這也不是真正的運動性。真正的運動性應是細菌細胞彼此的位置關系明顯的改變。細菌的運動性因種或菌株而異。有的運動迅速，有的運動緩慢。能運動的菌株也不一定每個細胞都同時運動，常常是大多數細胞不運動。少數細胞明顯運動。

(2)有些細胞不以鞭毛運動，而是滑動。鏡檢時應注意與游動區分開。一般游動速度高，滑動則遲緩。游動只能在懸液中運動，滑行則須附在固體表面進行。

(3)如室溫太低，以致載物臺溫度太低。有的細菌會因溫度太低而不能運動，應設法提高載物臺或載玻片的溫度，達到試驗菌能運動的溫度（如在室溫較高的試驗室鏡檢，或將載玻片放置保溫箱中一會兒再觀察）。

(4)鏡檢好氧菌時，則可能因蓋玻片下供氧不足而使試驗菌不能表現出運動性，遇到這種情況則應使蓋玻片下殘留一二個小氣泡，鏡檢氣泡四周或蓋片邊緣處的細菌運動性。

（5）用油鏡檢吋，蓋玻片的厚度以不超過0.17mm為宜。用過厚的蓋玻片時，調焦有困難。用相差油鏡觀察時載玻片的厚度約為1.2mm為宜。