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酶聯免疫試劑盒操作步驟
1. 確定本次檢測所需的已包被抗體的酶標板孔數目。
2. 將倍比稀釋的標準品各0.1ml依次加入一排7孔中,1孔只加樣品稀釋液的作為對照。處理后的標本按100ul每孔加入。
3. 酶標板加上蓋,37℃反應90分鐘。
4. 反應后用自動洗板機吸去酶標板內的液體;或甩去酶標板內液體,再對著吸水紙拍幾下。洗滌2次。
5. 將準備好的*抗體工作液按每孔0.1ml依次加入。37℃反應60分鐘。
6. 0.01M TBS或0.01M PBS洗滌3次,每次浸泡1分鐘左右。
7. 將準備好的ABC工作液按每孔0.1ml依次加入。37℃反應30分鐘。
8. 0.01M TBS或0.01M PBS洗滌5次,每次浸泡1-2分鐘左右。
9. 按每孔0.1ml依次加入TMB顯色工作液,37℃避光反應,反應過程中,要經常的觀察,當肉眼可見標準品的前3-4孔有 明顯的梯度藍色,后3-4孔差別不明顯時,即可加入TMB終止液0.1ml/孔。(顯色反應zui長不要超過30分鐘)。
10. 用酶標儀在450nm測定O.D.值。
11. 根據樣品的吸光值在坐標上找出對應的濃度。用戶也可以使用各種應用軟件來計算。應記住由于樣品稀釋了N倍,其實際濃度應該×N。
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