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人宮頸癌

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更新時間:2018-09-12 09:45:13瀏覽次數:675次

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XB1529/人宮頸癌/CASKI
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動物細胞與植物細胞比較:
  動物細胞與植物細胞相比較,具有很多相似的地方,如動物細胞也具有細胞膜、細胞質、細胞核等結構。但是動物細胞與植物細胞又有一些重要的區別,如動物細胞的zui外面是細胞膜,沒有細胞壁;動物細胞的細胞質中不含葉綠體,也不形成中央液泡。
  總之,不論是植物還是動物,都是由細胞構成的。細胞是生物體結構和功能的基本單位。
細胞
英文名:CELL
在文章中簡稱C。細胞并沒有統一的定義,近年來比較普遍的提法是:細胞是生命活動的基本單位。已知除病毒之外的所有生物均由細胞所組成,但病毒生命活動也必須在細胞中才能體現。一般來說,細菌等絕大部分微生物以及原生動物由一個細胞組成,即單細胞生物;高等植物與高等動物則是多細胞生物。細胞可分為兩類:原核細胞、真核細胞。但也有人提出應分為三類,即把原屬于原核細胞的古核細胞獨立出來作為與之并列的一類。研究細胞的學科稱為細胞生物學。世界上現存zui大的細胞為鴕鳥的卵子。
傳代培養中的細胞傳代培養(subculture),當原代培養成功以后,隨著培養時間的延長和細胞不斷分裂,一則細胞之間相互接觸而發生接觸性抑制,生長速度減慢甚至停止;另一方面也會因營養物不足和代謝物積累而不利于生長或發生中毒。此時就需要將培養物分割成小的部分,重新接種到另外的培養器皿(瓶)內,再進行培養。這個過程就稱為傳代(passage)或者再培養(subculture)。對單層培養而言,80%匯合或剛匯合的細胞是較理想的傳代階段.
  實驗步驟
  1.人無菌室之前用肥皂洗手,用75%酒精擦拭消毒雙手。
  2.倒置顯微鏡下觀察細胞形態,確定細胞是否需要傳代及細胞需要稀釋的倍數。將培養用液置37℃下預熱。
  3.超凈臺臺面應整潔,用0.1%新潔爾滅溶液擦凈。
  4.打開超凈臺的紫外燈照射臺面20min左右,關閉超凈臺的紫外燈,打開抽風機清潔空氣,除去臭氧。
  5.點燃酒精燈;取出無菌試管,巴士德吸管和刻度吸管;安上橡皮頭;過酒精燈火焰略燒后插在無菌試管內。
  6.將培養用液瓶口用75%酒精消毒,過酒精燈火焰后斜置于酒精燈旁的架子上。
  7.倒掉培養細胞的舊培養基。酌情可用2—3mLHanks液洗去殘留的舊培養基,或用少量胰酶涮洗一下。
  8.每個大培養瓶加入1mL胰酶,小瓶用量酌減,蓋好瓶蓋后在倒置顯微鏡下觀察,當細胞收回突起變圓時立即翻轉培養瓶,使細胞脫離胰酶,然后將胰酶倒掉。注意勿使細胞提早脫落入消化液中。
  9.加入少量的含血清的新鮮培養基,反復吹打消化好的細胞使其脫壁并分散,再根據分傳瓶數補加一定量的含血清的新鮮培養基(7~10mL/大瓶,3~5mL/小瓶)制成細胞懸液,然后分裝到新培養瓶中。蓋上瓶蓋,適度擰緊后再稍回轉,以利于CO2氣體的進入,將培養瓶放回CO2培養箱。
  10.對懸浮培養細胞,步驟7-9不做。可將細胞懸液進行離心去除舊培養基上清,加入新鮮培養基,然后分裝到各瓶中。
傳代方法:
1.懸浮生長細胞傳代
離心法傳代:離心(1000轉/分)去上清,沉淀物加新培養液后再混勻傳代。v2.半懸浮生長細胞傳代(Hela細胞)
此類細胞部分呈現貼壁生長現象,但貼壁不牢,可用直接吹打法使細胞從瓶壁脫落下來,進行傳代。
3.貼壁生長細胞傳代
采用酶消化法傳代。常用的消化液有0.25%的胰蛋白酶液。
 

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