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試劑盒標準曲線的繪制方法說明

閱讀:290發布時間:2013-4-10

小鼠elisa試劑盒標準曲線的繪制方法
一般來說作直線回歸的話,每次檢測的R2達到0.98,即R達到0.99,否則需要復測。
如果需要做幾次檢側,那么每次的斜率和截距相差不要超過百分之20,R是相關系數,x與y的相關性。一般用R2表示,更加。R2不是說是獨立的,其值越接近1說明其相關性越大。但是,一般的 R2不能達到這個值,0.95也不一定說明其相關性低,還應該檢測相關顯著差異性,無顯著差異則說明R是可信的。當然了,R2也是可信的。
什么是競爭性ELISA
競爭ELISA基于競爭結合技術,即樣本中的待測分子與固定量的標記的同樣分子(我們一般用堿性磷酸酶作為標記)同時與固定在孔板上的抗體的同一結合位點進行競爭,參照標準曲線,試驗數據值是定量的。
什么是夾心ELISA
夾層ELISA采用對樣本中分析物的特異的抗體作為固定化的捕獲抗體,然后用第二個帶標記的抗體作檢測,檢測抗體對分析物也是專一的。當參照標準曲線時,試驗數據值是定量的。
一個微孔板上可做多少個樣本
這是基于96孔微孔板的測試。除去陽性對照、陰性對照、本底(空白)和檢測抗體對照外,還剩下88孔,可做44個樣本(每個樣本做雙份)。
 
ELISA的標準曲線一般使用專門的曲線擬合工具,如:Curve Expert 1.3
下面以“Curve  Exert1.3”軟件為例,繪制ELISA標準曲線的方法如下
1 啟動“Curve  Expert1.3”
2.X軸輸入所對應的濃度值,Y軸輸入標準品的OD值,如圖:
3.單擊[運行]   按鈕,出現如下對話框
4.單擊[ok]按鈕,出現如下兩個對話框,關閉下面一個對話框
5. 在對話框的右上角出現一些曲線的名稱,從“1”開始依次點擊曲線名稱,在右下角會出現相應擬合的曲線。
6. 根據擬合的曲線選取ELISA擬合度*的曲線雙擊,出現如下對話框:
注意:選擇系數(即“r”值)的曲線方程來進行運算。在下面的對話框
右上角有“r”值 ,當“r”值越接近1擬合度越好
7.按[Ctrl]鍵+[L]鍵,出現如下對話框:
8.輸入標準的OD值,單擊[Calculate]按紐,即可得到待測蛋白的實際含量。(標本稀釋了N倍,運算出的數值應再成以N)。
9. 如想得到ELISA擬合曲線的方程,可在步驟6的對話框空白處右擊,選擇”Information”
10. 得到如下對話框:點擊“Copy”
  在你需要的位置粘貼即可得到如下數據:

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