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大鼠活化素A ELISA試劑盒組成:
1. 酶聯(lián)板:一塊( 96 孔)
2. 標(biāo)準(zhǔn)品(凍干品):2 瓶,每瓶臨用前以樣品稀釋液稀釋至 1ml ,蓋好后靜置10 分鐘以上,然后反復(fù)顛倒 / 搓動(dòng)以助溶解,其濃度為 10 ng/ml ,做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進(jìn)行倍比稀釋)后,分別稀釋成10 ng/ml ,5 ng/ml ,2.5 ng/ml ,1.25 ng/ml ,0.625 ng/ml ,0.312 ng/ml , 0.156 ng/ml ,樣品稀釋液直接作為標(biāo)準(zhǔn)濃度 0 ng/ml ,臨用前 15 分鐘內(nèi)配制。如配制 5 ng/ml 標(biāo)準(zhǔn)品:取 0.5ml (不要少于 0.5ml ) 10 n g/ml的上述 標(biāo)準(zhǔn)品加入含有 0.5ml 樣品稀釋液的 Eppendorf 管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
3. 樣品稀釋液: 1 × 20ml 。
4. 檢測(cè)稀釋液 A : 1 × 10ml 。
5. 檢測(cè)稀釋液 B : 1 × 10ml 。
6. 檢測(cè)溶液 A : 1 × 120 μ l ( 1:100 )臨用前以檢測(cè)稀釋液 A 1:100 稀釋,稀釋前根據(jù)預(yù)先計(jì)算好的每次實(shí)驗(yàn) 所需的總量配制( 100 μ l/ 孔),實(shí)際配制時(shí)應(yīng)多配制 0.1-0.2ml 。如 10 μ l 檢測(cè)溶液 A 加 990 μ l 檢測(cè)稀釋液 A 的比例配制,輕輕混勻,在使用前一小時(shí)內(nèi)配制。
7. 檢測(cè)溶液 B : 1 × 120 μ l/ 瓶( 1:100 )臨用前以檢測(cè)稀釋液 B 1:100 稀釋。稀釋方法同檢測(cè)溶液 A 。
8. 底物溶液: 1 × 10ml/ 瓶。
9. 濃洗滌液: 1 × 30ml/ 瓶,使用時(shí)每瓶用蒸餾水稀釋 25 倍。
10. 終止液: 1 × 10ml/ 瓶( 2N H2SO4 )。
11. 覆膜: 5 張
12. 使用說明書: 1 份
自備材料:
1. 蒸餾水。
2. 加樣器:5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。
3. 振蕩器及磁力攪拌器等。
大鼠活化素A ELISA試劑盒樣品收集、處理及保存方法:
1、 血清……操作過程中避免任何細(xì)胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。收集血液后,1000×g離心10分鐘將血紅細(xì)胞迅速小心地分離。
2、 血漿……EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測(cè)。1000×g離心30分鐘去除顆粒。
3、 細(xì)胞上清液……1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
4、 組織勻漿……將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘,取上清液。
5、 保存……如果樣品不立即使用,應(yīng)將其分成小部分-70℃保存,避免反復(fù)冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒,檢測(cè)前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
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