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閱讀:1239發(fā)布時(shí)間:2016-12-1
JM110感受態(tài)細(xì)胞特點(diǎn): 一種琥珀抑制型 F’重組缺陷菌株。支持 M13 噬菌體載體的生長,對(duì)轉(zhuǎn)染的 DNA 有修飾作用,但 無限制作用。該菌株中的 F’帶有 lacZΔM15,后者使得與在 λZAP 中編碼的 β-半乳糖 苷酶氨基端進(jìn)行 α-互補(bǔ), 可用于藍(lán)白斑篩選。
JM110感受態(tài)細(xì)胞實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng):
1. 感受態(tài)細(xì)胞應(yīng)保存在-80℃,不可反復(fù)凍融,否則其轉(zhuǎn)化效率將會(huì)降低。
2. 實(shí)驗(yàn)過程中應(yīng)嚴(yán)格無菌操作,防止其它 DNA 或雜菌的污染,避免為以后的篩選、鑒定帶來影響。
3. 轉(zhuǎn)化時(shí),轉(zhuǎn)化效率與外源 DNA 的濃度在一定范圍內(nèi)成正比,但當(dāng)加入的外源 DNA 量過多或體積過大反而會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。轉(zhuǎn)化時(shí) DNA 體積要小于感受態(tài)細(xì)胞體積的十分之一。
4. 轉(zhuǎn)化率的計(jì)算:轉(zhuǎn)化率=產(chǎn)生菌落的總數(shù)/鋪板 DNA 總量。
5. 為防止轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)不成功,可以保留部分連接產(chǎn)物,以重新轉(zhuǎn)化,將損失降到zui低。
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