Taq DNA polymerase是94 kDa的耐熱性DNA聚合酶及配合其使用的10×PCR Buffer以及6×Loading Buffer。是將改良后的DNA Polymerase的基因經(jīng)過克隆轉(zhuǎn)化到大腸桿菌中進(jìn)行表達(dá)后，分離純化而得到的性狀優(yōu)良，功能強(qiáng)大的DNA聚合酶。它比天然Taq DNA聚合酶有更加強(qiáng)大的功能以及更加高質(zhì)量的活性。具有擴(kuò)增速度快、靈敏度高、特異性強(qiáng)、穩(wěn)定性好等優(yōu)點(diǎn)。使用本產(chǎn)品擴(kuò)增得到的PCR產(chǎn)物的3′端會(huì)進(jìn)行加“Ａ”處理，因此，PCR產(chǎn)物可直接用于T載體的酶連中。
問題及解決方案：
假陰性，不出現(xiàn)擴(kuò)增條帶
PCR反應(yīng)的關(guān)鍵環(huán)節(jié)有①模板核酸的制備②引物的質(zhì)量與特異性③酶的質(zhì)量 ④PCR循環(huán)條件。尋找原因應(yīng)逐個(gè)排除。
- 假陽性
出現(xiàn)的PCR擴(kuò)增條帶與目的靶序列條帶一致，有時(shí)其條帶更整齊，亮度更高。原因可能是引物設(shè)計(jì)不合適：選擇的擴(kuò)增序列與非目的擴(kuò)增序列有同源性，因而在進(jìn)行PCR擴(kuò)增時(shí)，擴(kuò)增出的PCR產(chǎn)物為非目的性的序列。靶序列太短或引物太短，容易出現(xiàn)假陽性。需重新設(shè)計(jì)引物。 - 出現(xiàn)非特異性擴(kuò)增帶
PCR擴(kuò)增后出現(xiàn)的條帶與預(yù)計(jì)的大小不一致，或大或小，或者同時(shí)出現(xiàn)特異性擴(kuò)增帶 與非特異性擴(kuò)增帶。其原因：一是引物與靶序列不*互補(bǔ)、 或引物聚合形成二聚體。二是Mg2+濃度過高、退火溫度過低，及PCR循環(huán)次數(shù)過多有關(guān)。Mg2+濃度或者重新設(shè)計(jì)引物即可解決。
出現(xiàn)片狀拖帶或涂抹帶
PCR擴(kuò)增有時(shí)出現(xiàn)涂抹帶或片狀帶或地毯樣帶。其原因往往由于酶量過多或酶的質(zhì)量差，dNTP濃度過高，Mg2+濃度過高，退火溫度過低，循環(huán)次數(shù)過多引起。也需逐個(gè)排除。
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