質(zhì)粒小提試劑盒常見(jiàn)問(wèn)題及解答
沒(méi)有提出質(zhì)?；蛘哔|(zhì)粒濃度很低
a、菌種老化：
建議：對(duì)于甘油保存的菌種，需要*行活化。涂布或者劃線菌種，重新挑選單菌落進(jìn)行液體培養(yǎng)，并對(duì)菌種進(jìn)行初搖活化，按照1：500的比例進(jìn)行菌種培養(yǎng)。二次培養(yǎng)細(xì)胞不要超過(guò)16小時(shí)。
b、質(zhì)粒丟失
建議：某些質(zhì)粒在多次繼代培養(yǎng)的過(guò)程中會(huì)出現(xiàn)丟失的現(xiàn)象，另外檢查篩選抗生素的濃度是否正確。
c、裂解不充分
建議：如果采用超過(guò)推薦量的菌體進(jìn)行質(zhì)粒制備，會(huì)導(dǎo)致菌體裂解不充分?？蛇m當(dāng)減少菌體的用量或者相應(yīng)增大各種Buffer的用量。請(qǐng)根據(jù)選取的試劑盒，處理相應(yīng)量的細(xì)菌量。
d、Buffer中有沉淀未溶解
建議：Buffer B和Buffer C在溫度較低時(shí)會(huì)出現(xiàn)沉淀，使用前請(qǐng)檢查是否有沉淀生成，如有沉淀生成，請(qǐng)置于37℃溫育片刻，待溶液澄清后使用。
e、DNA Wash Buffer中未按要求加入乙醇
建議：按照說(shuō)明書(shū)要求加入要求量的無(wú)水乙醇，使用后旋緊瓶蓋，防止乙醇揮發(fā)。
f、溶解液pH值不正確
建議：將DNA從柱子上溶解下來(lái)的zui適pH值在7.0~8.5之間，如果溶解液的pH超出此范圍將會(huì)顯著影響溶解效果，請(qǐng)使用試劑盒配套的Elution Buffer（pH 8.5，10 mM Tris-HCl）進(jìn)行溶解，如果用ddH2O或者其他溶液進(jìn)行溶解，請(qǐng)確保pH在7.0~8.5之間。
g、溶解體積及時(shí)間的選擇
建議：溶解體積將會(huì)影響zui終的收獲量，溶解體積越大，收獲量越高，但是濃度將會(huì)降低。請(qǐng)使用試劑盒推薦的溶解體積進(jìn)行溶解，以保證的收獲量和濃度。如果需要高濃度的質(zhì)粒，請(qǐng)減少溶解體積。另外，如果想收獲高濃度高收獲量的質(zhì)粒，可進(jìn)行二次溶解。
建議：加入Elution Buffer后，室溫放置2~5 min，更有利于溶解。
質(zhì)粒純度不高
a、蛋白質(zhì)污染OD260/ OD280<1.8
建議：選擇推薦量的菌體，離心后小心吸取上清，如果上清液中混有懸浮物，可再次離心，以*去除蛋白質(zhì)。
b、RNA污染OD260/ OD280>2.0
建議：檢查配送的RNase A是否*加入到Buffer A中，加入RNase后，Buffer A/RNase應(yīng)該存放在4℃，如果存放時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，或者沒(méi)有正確存放，請(qǐng)重新加入RNase。
c、基因組DNA污染
建議：加入Buffer B后，輕輕顛倒混勻，避免劇烈震蕩渦旋，加入Buffer B的處理時(shí)間不要超過(guò)5 min。
注：內(nèi)容供參考，具體產(chǎn)品信息請(qǐng)來(lái)電或在線咨詢。
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