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96T 人血清淀粉樣蛋白A（SAA ELISA試劑盒）ELISA試劑盒

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產品型號人血清淀粉樣蛋白A（SAA ELISA試劑盒）ELISA試劑盒

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更新時間：2018-04-20 11:24:27瀏覽次數：934次

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廈門慧嘉生物科技有限公司

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產品簡介

廈門慧嘉生物*經營人血清淀粉樣蛋白A(SAA ELISA試劑盒)ELISA試劑盒。誠信經營，價格實惠，服務周到，質量有保證。歡迎廣告老師來詢！: :

詳細介紹

廈門慧嘉生物*經營ELISA試劑盒及Santa/Abcam抗體、Prospec細胞因子、Sigma/Amresco/Qiagen、Axygen耗材等生物試劑產品。實驗為大，誠信經營，為客戶提供“zui高質量的產品”和“的服務”。歡迎廣大老師來詢！: : 1048735792 或登陸http://www.biohj.com/（向客服人員索取說明書）

產品名稱：人血清淀粉樣蛋白A（SAA）ELISA Kit
產品英文： Human Serum amyloid A,SAA ELISA Kit
產品規格： 96T
產品類別：人心肌梗塞類ELISA試劑盒[Human cardiomyopathy ELISA Kit

人血清淀粉樣蛋白A（SAA）酶聯免疫分析試劑盒使用說明書
本試劑盒僅供研究使用

檢測范圍：156 ng/ml - 10000 ng/ml
zui低檢測限：39 ng/ml
特異性：本試劑盒可同時檢測天然或重組的人SAA，且與其他相關蛋白無交叉反應。
有效期：6個月
預期應用：ELISA法定量測定人血清、血漿、細胞培養上清或其它相關生物液體中SAA含量。
說明
1．試劑盒保存：-20℃（較長時間不用時）；2-8℃（頻繁使用時）。
2．濃洗滌液低溫保存會有鹽析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶。
3．中、英文說明書可能會有不*之處，請以英文說明書為準。
4．剛開啟的酶聯板孔中可能會含有少許水樣物質，此為正常現象，不會對實驗結果造成任何影響。
概述
血清淀粉樣蛋白A（serum amyloid A，SAA）是一種急性時限反應蛋白，屬于載脂蛋白家族中的異質類蛋白質，相對分子量約12000。在急性時限反應中，經IL-1、IL-6和TNF刺激，SAA在肝臟中由被激活的巨噬細胞和纖維母細胞合成，可升高到zui初濃度的100-1000 倍，但半衰期極短，只有50分鐘左右。血清淀粉樣蛋白 A 與高密度脂蛋白（HDL）有關，它能在炎癥期間調節高密度脂蛋白的代謝。血清淀粉樣蛋白 A 一個特別重要的特性是其降解產物能以淀粉樣蛋白 A （AA）原纖維的方式沉積在不同的器官中，在慢性炎癥疾病中這是一種嚴重的并發癥。與 C 反應蛋白（CRP）類似，血清淀粉樣蛋白 A 的含量濃度是反映感染性疾病早期炎癥的敏感指標，有助于診斷炎癥、評估其活性、監控其活動及治療。但是，血清淀粉樣蛋白 A 檢測在診斷發生病毒感染、腎移植排斥反應的患者（特別是進行免疫抑制治療的患者）以及用腎上腺皮質激素治療的囊性纖維化患者方面，比 C 反應蛋白更確鑿。研究發現，在患炎性關節炎的案例中，血清淀粉樣蛋白 A 與疾病活動性的關系zui密切。同時檢測 C 反應蛋白和血清淀粉樣蛋白 A 能提高對感染的診斷靈敏度。對于淀粉樣蛋白 A 淀粉樣變性患者，以將血清淀粉樣蛋白 A 水平回復至正常為宗旨的治療，能改善病情。
實驗原理
用純化的抗體包被微孔板，制成固相載體，往包被抗SAA抗體的微孔中依次加入標本或標準品、*化的抗SAA抗體、HRP標記的親和素，經過*洗滌后用底物TMB顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的SAA呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），計算樣品濃度。
試劑盒組成及試劑配制
1. 酶聯板（Assay plate ）：一塊（96孔）。
2. 標準品（Standard）：2瓶（凍干品）。
3. 樣品稀釋液（Sample Diluent）：1×20ml/瓶。
4. *標記抗體稀釋液（Biotin-antibody Diluent）：1×10ml/瓶。
5. 辣根過氧化物酶標記親和素稀釋液（HRP-avidin Diluent）：1×10ml/瓶。
6. *標記抗體（Biotin-antibody）：1×120ul/瓶（1：100）
7. 辣根過氧化物酶標記親和素（HRP-avidin）：1×120ul/瓶（1：100）
8. 底物溶液（TMB Substrate）：1×10ml/瓶。
9. 濃洗滌液（Wash Buffer）：1×20ml/瓶，使用時每瓶用蒸餾水稀釋25倍。
10. 終止液（Stop Solution）：1×10ml/瓶（2N H2SO4）。

需要而未提供的試劑和器材
1. 標準規格酶標儀
2. 高速離心機
3. 電熱恒溫培養箱
4. 干凈的試管和Eppendof管
5. 系列可調節移液器及吸頭，一次檢測樣品較多時，用多通道移液器
6. 蒸餾水，容量瓶等
標本的采集及保存
1. 血清：全血標本請于室溫放置2小時或4℃過夜后于1000 x g離心20分鐘，取上清即可檢測，或將標本放于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。
2. 血漿：可用EDTA或肝素作為抗凝劑，標本采集后30分鐘內于2 - 8° C 1000 x g離心15分鐘，或將標本放于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。
3. 細胞培養物上清或其它生物標本：請1000 x g離心20分鐘，取上清即可檢測，或將標本放于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。
注：標本溶血會影響zui后檢測結果，因此溶血標本不宜進行此項檢測。
標本的稀釋原則：
首先通過文獻檢索的方式了解待測樣本的大致含量，確定適當的稀釋倍數。只有稀釋至標準曲線的范圍內，檢測的結果才是準確的。稀釋的過程中，應做好詳細的記錄。zui后計算濃度時，稀釋了“N”倍，標本的濃度應再乘以“N”。
標準品的稀釋原則：2瓶，每瓶臨用前以樣品稀釋液稀釋至1ml，蓋好后靜置10分鐘以上，然后反復顛倒/搓動以助溶解，其濃度為10000 ng/ml，做系列倍比稀釋后，分別稀釋10000 ng/ml，5000 ng/ml，2500 ng/ml，1250 ng/ml，625 ng/ml，312 ng/ml，156 ng/ml，樣品稀釋液直接作為標準濃度0 ng/ml，臨用前15分鐘內配制。
如配制5000 ng/ml標準品：取0.5ml（不要少于0.5ml）10000 ng/ml的上述標準品加入含0.5ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。
*標記抗體的稀釋原則：
臨用前以*標記抗體稀釋液稀釋，稀釋前根據預先計算好的每次實驗所需的總量配制（每孔100ul），實際配制時應多配制0.1-0.2ml。如10ul*標記抗體加990ul*標記抗體稀釋液的比例配制，輕輕混勻，在使用前一小時內配制。
辣根過氧化物酶標記親和素的稀釋原則：
臨用前以辣根過氧化物酶標記親和素稀釋液稀釋，稀釋前根據預先計算好的每次實驗所需的總量配制（每孔100ul），實際配制時應多配制0.1-0.2ml。如10ul辣根過氧化物酶標記親和素加990ul辣根過氧化物酶標記親和素稀釋液的比例配制，輕輕混勻，在使用前一小時內配制。
操作步驟
實驗開始前，請提前配置好所有試劑，試劑或樣品稀釋時，均需混勻，混勻時盡量避免起泡。每次檢測都應該做標準曲線。如樣品濃度過高時，用樣品稀釋液進行稀釋，以使樣品符合試劑盒的檢測范圍。
1. 加樣：分別設空白孔、標準孔、待測樣品孔。空白孔加樣品稀釋液100ul，余孔分別加標準品或待測樣品100ul，注意不要有氣泡，加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻，酶標板加上蓋或覆膜，37℃反應120分鐘。
為保證實驗結果有效性，每次實驗請使用新的標準品溶液。
2. 棄去液體，甩干，不用洗滌。每孔加*標記抗體工作液 100ul（取1ul*標記抗體加99ul*標記抗體稀釋液的比例配制，輕輕混勻，在使用前一小時內配制），37℃,60分鐘。
3. 溫育60分鐘后，棄去孔內液體，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分鐘，350ul/每孔，甩干。
4. 每孔加辣根過氧化物酶標記親和素工作液（同*標記抗體工作液） 100ul，37℃，60分鐘。
5. 溫育60分鐘后，棄去孔內液體，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分鐘，350ul/每孔，甩干。
6. 依序每孔加底物溶液90ul，37℃避光顯色（30分鐘內，此時肉眼可見標準品的前3-4孔有明顯的梯度藍色，后3-4孔梯度不明顯，即可終止）。
7. 依序每孔加終止溶液50ul，終止反應（此時藍色立轉黃色）。終止液的加入順序應盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實驗結果的準確性，底物反應時間到后應盡快加入終止液。
8. 用酶聯儀在450nm波長依序測量各孔的光密度（OD值）。在加終止液后15分鐘以內進行檢測。
注：
1. 用戶在初次使用試劑盒時，應將各種試劑管離心數分鐘，以便試劑集中到管底。
2. 每次實驗留一孔作為空白調零孔，該孔不加任何試劑，只是zui后加底物溶液及2N H2SO4。測量時先用此孔調OD值至零。
3. 為防止樣品蒸發，試驗時將反應板放于鋪有濕布的密閉盒內，酶標板加上蓋或覆膜。
4. 未使用完的酶標板或者試劑，請于2-8℃保存。標準品、*標記抗體工作液、辣根過氧化物酶標記親和素工作液請依據所需的量配置使用。請勿重復使用已稀釋過的標準品、*標記抗體工作液或、辣根過氧化物酶標記親和素工作液。
5. 建議檢測樣品時均設雙孔測定，以保證檢測結果的準確性。
洗板方法
手工洗板方法：吸去（不可觸及板壁）或甩掉酶標板內的液體；在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙，酶標板朝下用力拍幾次；將*的洗滌緩沖液至少0.3ml注入孔內，浸泡1-2分鐘。根據需要，重復此過程數次。
自動洗板：如果有自動洗板機，應在熟練使用后再用到正式實驗過程中。
計算
以標準物的濃度為橫坐標（對數坐標），OD值為縱坐標（普通坐標），在半對數坐標紙上繪出標準曲線，根據樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度；再乘以稀釋倍數；或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數，即為樣品的實際濃度。
注意事項
1. 當混合蛋白溶液時應盡量輕緩，避免起泡。
2. 洗滌過程非常重要，不充分的洗滌易造成假陽性。
3. 一次加樣時間控制在5分鐘內，如標本數量多，*使用排槍加樣。
4. 請每次測定的同時做標準曲線，做復孔。
5. 如標本中待測物質含量過高，請先稀釋后再測定，計算時請zui后乘以稀釋倍數。
6. 在配制標準品、檢測溶液工作液時，請以相應的稀釋液配制，不能混淆。
7. 底物請避光保存。
8. 不要用其它生產廠家的試劑替換試劑盒中的試劑。