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（TNF-α）小鼠腫瘤壞死因子α（TNF-α）Elisa試劑盒說明書

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 Mouse Tumor Necrosis Factor α

                    （TNF-α）ELISA KIT

                        Catalog No. CSB-E04741m

                                    （96 tests）

    This immunoassay kit allows for the in vitro quantitative determination of mouse

    TNF-α concentrations in serum, plasma and other biological fluids.

    Expiration date     six months from the date of manufacture

    FOR RESEARCH USE ONLY. NOT FOR USE IN DIAGNOSTIC PROCEDURES.

                                           1

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INTRODUCTION

The     prototype     ligand   of   the   TNF    superfamily,      TNF-α/TNFSF1A,          is  a

pleiotropic cytokine that plays a central role in inflammation and apoptosis.

It   is   synthesized as a  26  kDa, type   II  transmembrane protein   that   is   233

amino acids in length. It contains a 30 amino acid （aa） cytoplasmic domain,

a   26   aa   transmembrane         segment,      and   a  177    aa   extracellular    region.

TNF-αis        assembled         intracellularly      to     form     a     transmembrane,

non-covalently-linked   homotrimeric   protein.   The   157   aa   residue   soluble

form      of     TNF-α   （sTNF-αis           released       from     the     C-terminus        of

the    transmembrane          protein    through     the   activity   of TNF-α-converting

enzyme （TACE）, a membrane -bound disintegrin metalloproteinase. Human

cells   known   to   express   TNF-αinclude   B   cells,   colonic   columnar   epithelial

cells,    NK    and     CD3+CD56+          hepatic    natural    T    cells,   macrophages,

monocytes and monocyte-derived dendritic cells, CD4+ and CD8+ T cells,

mast cells, neutrophils, keratinocytes, plasma cells, and adipocytes.

PRINCIPLE OF THE ASSAY

The     microtiter   plate   provided     in  this  kit  has   been   pre-coated       with   an

antibody   specific   to  TNF-α.   Standards   or   samples   are   then   added   to   the

appropriate       microtiter    plate   wells    with   a   biotin-conjugated       polyclonal

antibody      preparation       specific    for  TNF-α  and        Avidin     conjugated      to

Horseradish        Peroxidase      （HRP）    is  added     to  each    microplate     well   and

                                                2

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incubated. Then a TMB （3,3'5, 5' tetramethyl-benzidine） substrate solution

is    added      to   each    well.    Only    those     wells    that   contain     TNF-α,

biotin-conjugated       antibody    and   enzyme-conjugated         Avidin   will  exhibit  a

change      in  color.  The    enzyme-substrate        reaction    is  terminated    by   the

addition   of   a   sulphuric   acid   solution   and   the   color   change   is   measured

spectrophotometrically         at   a   wavelength      of   450    nm    ±  2    nm.    The

concentration of TNF-α in the samples is then determined by comparing the

O.D. of the samples to the standard curve.

DETECTION RANGE

15.6   pg/ml   -1000   pg/ml.   The   standard   curve   concentrations   used   for   the

ELISA’s were 1000 pg/ml, 500 pg/ml, 250 pg/ml, 125 pg/ml, 62.5pg/ml, 31.2

pg/ml, 15.6 pg/ml.

SPECIFICITY

This    assay     recognizes      recombinant      and    natural    mouse     TNF-α.     No

significant cross-reactivity or interference was observed.

SENSITIVITY

The   minimum   detectable   dose   of   mouse   TNF-α  is   typically   less   than   3.9

pg/ml.

The sensitivity of this assay, or Lower Limit of Detection （LLD） was defined

as the lowest protein concentration that could be differentiated from zero.

                                              3

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MATERIALS PROVIDED

               Reagent                                         Quantity

               Assay plate                                          1

               Standard                                             2

               Sample Diluent                                  1 x 20 ml

               Biotin-antibody Diluent                         1 x 10 ml

                HRP-avidin Diluent                             1 x 10 ml

               Biotin-antibody                                 1 x 120l

                HRP-avidin                                     1 x 120l

                                                               1 x 20 ml

               Wash Buffer

                                                            （25×concentrate）

               TMB Substrate                                   1 x 10 ml

               Stop Solution                                   1 x 10 ml

STORAGE

1.   Unopened   test   kits   should   be   stored   at   2-8°C   upon   receipt   and   the

    microtiter plate should be kept in a sealed bag. The test kit may be used

    throughout      the  expiration    date  of  the   kit,  provided   it  is  stored  as

    prescribed above. Refer to the package label for the expiration date.

2.   Opened test plate should be stored at 2-8°C in the aluminum foil bag

    with desiccants to minimize exposure to damp air. The kits will remain

    stable until the expiring date shown, provided it is stored as prescribed

    above.

3.   A   microtiter   plate   reader   with   a   bandwidth   of   10   nm   or   less   and   an

    optical   density   range   of   0-3   OD   or   greater   at   450nm   wavelength   is

    acceptable for use in absorbance measurement.

                                             4

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REAGENT PREPARATION

Bring all reagents to room temperature before use.

1.   Wash Buffer          If crystals have formed in the concentrate, warm up to

     room   temperature   and   mix   gently   until   the   crystals  have   compley

     dissolved. Dilute 20 ml of Wash Buffer Concentrate  into deionized or

     distilled water to prepare 500 ml of Wash Buffer.

2.   Standard         Centrifuge   the   standard   vial   at   6000-10000rpm   for       30s.

     Reconstitute       the  Standard       with   1.0   ml   of  Sample       Diluent.     This

     reconstitution      produces      a  stock    solution   of  1000     pg/ml.   Allow    the

     standard to sit for a minimum of 15 minutes with gentle agitation prior to

     making   serial      dilutions.   The   undiluted    standard     serves    as   the  high

     standard      （1000     pg/ml）.   The   Sample       Diluent     serves    as   the   zero

     standard （0 pg/ml）. Prepare fresh for each assay. Use within 4 hours

     and discard after use.

3.   Biotin-antibody          Centrifuge     the   vial  before    opening.     Dilute   to  the

     working        concentration        using     Biotin-antibody           Diluent（1:100）,

     respectively.

4.   HRP-avidin         Centrifuge the vial before opening. Dilute to the working

     concentration using HRP-avidin Diluent（1:100）, respectively.

Precaution: The Stop Solution provided with this kit is an acid solution. Wear

             eye, hand, face, and clothing protection when using this material.

                                                5

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OTHER SUPPLIES REQUIRED

      Microplate   reader   capable   of   measuring   absorbance  at   450   nm,   with

     the correction wavelength set at 540 nm or 570 nm.

      Pipettes and pipette tips.

      Deionized or distilled water.

      Squirt bottle, manifold dispenser, or automated microplate washer.

      An incubator which can provide stable incubation conditions up to

     37°C±0.5°C.

SAMPLE COLLECTION AND STORAGE

     Serum      Use a serum separator tube （SST） and allow samples to clot

     for 30 minutes before centrifugation for 15 minutes at 1000 g. Remove

     serum and assay immediay or aliquot and store samples at -20°C.

     Centrifuge   the   sample   again   after   thawing   before   the   assay.   Avoid

     repeated freeze-thaw cycles.

     Plasma       Collect     plasma     using   citrate,  EDTA,     or   heparin    as   an

     anticoagulant. Centrifuge for 15 minutes at 1000 g within 30 minutes of

     collection.   Assay   immediay   or   aliquot   and   store  samples   at   -20°C.

     Centrifuge   the   sample   again   after   thawing   before   the   assay.   Avoid

     repeated freeze-thaw cycles.

Note: Grossly hemolyzed samples are not suitable for use in this assay.

                                              6

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ASSAY PROCEDURE

Bring     all  reagents    and    samples     to   room    temperature     before     use.   It  is

recommended that all samples, standards, and controls be assayed in duplicate.

All   the   reagents   should   be   added   directly   to   the   liquid   level   in   the   well.   The

pipette should avoid contacting the inner wall of the well.

 1.   Add   100l   of   Standard,   Blank,   or   Sample   per   well.   Cover   with   the

     adhesive strip. Incubate for 2 hours at 37°C.

 2.   Remove the liquid of each well, don’t wash.

 3.   Add 100l of Biotin-antibody working solution to each well. Incubate

     for   1   hour   at  37°C.    Biotin-antibody   working           solution   may     appear

     cloudy.   Warm   up   to   room   temperature   and   mix   gently  until   solution

     appears uniform.

 4.   Aspirate each well and wash, repeating the process three times for a

     total of three washes. Wash: Fill each well with Wash Buffer （200l） and

     let   it  stand for  2  minutes, then   remove   the   liquid  by flicking  the  plate

     over a sink. The remaining drops are removed by patting the plate on a

     paper   towel.   Complete   removal   of   liquid   at   each   step   is   essential   to

     good performance.

 5.   Add   100l   of  HRP-avidin   working   solution   to   each   well.   Cover   the

     microtiter plate with a new adhesive strip. Incubate for 1 hour at 37°C.

 6.   Repeat the aspiration and wash three times as step 4.

 7.   Add 90l of TMB Substrate to each well. Incubate for 10-30 minutes at

     37°C.     Keeping      the  plate    away    from    drafts   and    other   temperature

     fluctuations in the dark.

                                                 7

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8.    Add    50l    of  Stop    Solution   to     each    well  when     the  first   four  wells

     containing the highest concentration of standards develop obvious blue

     color. If color change does not appear uniform, gently tap the plate to

     ensure thorough mixing.

9.    Determine the optical density of each well within 30 minutes, using a

     microplate reader set to 450 nm.

CALCULATION OF RESULTS

Using   the   professional   soft   "Curve   Exert   1.3"   to   make   a   standard   curve   is

recommended, which can be downloaded from our web.

Average the duplicate readings for each standard, control, and sample and

subtract the average zero standard optical density. Create a standard curve

by reducing the data using computer software capable of generating a four

parameter logistic （4-PL） curve-fit. As an alternative, construct a standard

curve   by   plotting   the   mean   absorbance   for   each   standard   on   the   y-axis

against the concentration on the x-axis and draw a best fit curve through the

points on the graph. The data may be linearized by plotting the log of the

TNF-α concentrations versus the log of the O.D. and the best fit line can be

determined        by   regression      analysis.     This   procedure       will  produce      an

adequate but less precise fit of the data. If samples have been diluted, the

concentration       read   from    the   standard     curve   must    be  multiplied     by   the

dilution factor.

                                                8

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LIMITATIONS OF THE PROCEDURE

      The kit should not be used beyond the expiration date on the kit label.

      Do not mix or substitute reagents with those from other lots or sources.

      It is important that the Standard Diluent selected for the standard curve

     be consistent with the samples being assayed.

      If samples generate values higher than the highest standard, dilute the

     samples with the appropriate Standard Diluent and repeat the assay.

      Any    variation   in   Standard     Diluent,   operator,     pipetting   technique,

     washing   technique,   incubation   time   or   temperature,  and   kit   age   can

     cause variation in binding.

      This assay is designed to eliminate interference by soluble receptors,

     binding proteins, and other factors present in biological samples. Until

     all   factors   have   been   tested   in   the   Immunoassay,   the   possibility   of

     interference cannot be excluded.

TECHNICAL HINTS

      Centrifuge vials before opening to collect contents.

      When mixing or reconstituting protein solutions, always avoid foaming.

      To avoid cross-contamination, change pipette tips between additions of

     each standard level, between sample additions, and between reagent

     additions. Also, use separate reservoirs for each reagent.

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      When   using   an   automated   plate   washer,   adding   a   30  second   soak

     period   following   the   addition   of   wash   buffer,   and/or   rotating   the   plate

     180 degrees between wash steps may improve assay precision.

      To   ensure   accurate   results,   proper   adhesion   of   plate   sealers   during

     incubation steps is necessary.

      Substrate Solution should remain colorless or light blue until added to

     the    plate.   Keep     Substrate     Solution     protected     from    light.  Substrate

     Solution   should   change   from   colorless   or   light   blue   to   gradations   of

     blue.

      Stop Solution should be added to the plate in the  same order as the

     Substrate Solution. The color developed in the wells will turn from blue

     to   yellow   upon   addition   of   the   Stop   Solution. Wells  that   are   green   in

     color indicate that the Stop Solution has not mixed thoroughly with the

     Substrate Solution.

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         小鼠腫瘤壞死因子小鼠腫瘤壞死因子α（TNF-α）酶聯(lián)免疫分析酶聯(lián)免疫分析

         小鼠腫瘤壞死因子小鼠腫瘤壞死因子                      酶聯(lián)免疫分析酶聯(lián)免疫分析

                         試劑盒使用說明書試劑盒使用說明書

                         試劑盒使用說明書試劑盒使用說明書

本試劑盒僅供研究使用本試劑盒僅供研究使用

本試劑盒僅供研究使用本試劑盒僅供研究使用

產(chǎn)品編號產(chǎn)品編號：：CSB-E04741m

產(chǎn)品編號產(chǎn)品編號：：

檢測范圍檢測范圍：：15.6 pg/ml - 1000 pg/ml

檢測范圍檢測范圍：：

zui低檢測限zui低檢測限：：3.9 pg/ml

zui低檢測限zui低檢測限：：

特異性特異性：：本試劑盒可同時檢測天然或重組的小鼠TNF-α，且與其他相關(guān)蛋

特異性特異性：：

白無交叉反應(yīng)。

有效期有效期：：6 個月

有效期有效期：：

預(yù)期應(yīng)用預(yù)期應(yīng)用：：ELISA 法定量測定小鼠血清、血漿、細(xì)胞培養(yǎng)上清或其它相關(guān)

預(yù)期應(yīng)用預(yù)期應(yīng)用：：

生物液體中TNF-α含量。

說明說明

說明說明

1   試劑盒保存：未開封的試劑盒應(yīng)儲存于2-8℃；開封后的酶標(biāo)板應(yīng)與干燥

    劑一起儲存于鋁箔袋中置于2-8℃保存。僅在此出儲存條件下，產(chǎn)品在有

    效期內(nèi)可正常使用。

2   濃洗滌液低溫保存會有鹽析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶。

3   中、英文說明書可能會有不一致之處，請以英文說明書為準(zhǔn)。

4   剛開啟的酶聯(lián)板孔中可能會含有少許水樣物質(zhì)，此為正常現(xiàn)象，不會對實(shí)

    驗(yàn)結(jié)果造成任何影響。

實(shí)驗(yàn)原理實(shí)驗(yàn)原理

實(shí)驗(yàn)原理實(shí)驗(yàn)原理

     用純化的抗體包被微孔板，制成固相載體，往包被抗TNF-α抗體的微孔

中依次加入標(biāo)本或標(biāo)準(zhǔn)品、*化的抗TNF-α抗體、HRP 標(biāo)記的親和素，

經(jīng)過*洗滌后用底物TMB 顯色。TMB 在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，

并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的TNF-α呈正相關(guān)。

用酶標(biāo)儀在450nm 波長下測定吸光度 （OD 值），計算樣品濃度。

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試劑盒組成及試劑配制試劑盒組成及試劑配制

試劑盒組成及試劑配制試劑盒組成及試劑配制

1.  酶聯(lián)板酶聯(lián)板（Assay plate ）：                                      一塊（96 孔）。

    酶聯(lián)板酶聯(lián)板

2.  標(biāo)準(zhǔn)品標(biāo)準(zhǔn)品（Standard）：                                          2 瓶（凍干品）。

    標(biāo)準(zhǔn)品標(biāo)準(zhǔn)品

3.  樣品稀釋液樣品稀釋液（Sample Diluent）：                                  1×20ml/瓶。

    樣品稀釋液樣品稀釋液

4.  *標(biāo)記抗體稀釋液*標(biāo)記抗體稀釋液（（Biotin-antibody Diluent）：）             1×10ml/瓶。

    *標(biāo)記抗體稀釋液*標(biāo)記抗體稀釋液（（                            ））

5.  辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素稀釋液辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素稀釋液（（HRP-avidin Diluent）） 1×10ml/瓶。

    辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素稀釋液辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素稀釋液（（                         ））

6.  *標(biāo)記抗體*標(biāo)記抗體（（Biotin-antibody）：）                 1×120l/瓶（1：100）。

    *標(biāo)記抗體*標(biāo)記抗體（（                  ））

7.  辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素（（HRP-avidin）：）            1×120l/瓶（1：100）。

    辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素（（                ））

8.  底物溶液底物溶液（（TMB Substrate）：）                                   1×10ml/瓶。

    底物溶液底物溶液（（                 ））

9.  濃洗滌液濃洗滌液（（Wash Buffer ）） 1×20ml/瓶，使用時每瓶用蒸餾水稀釋25 倍。

    濃洗滌液濃洗滌液（（               ））

10. 終止液終止液（（Stop Solution）：）                                     1×10ml/瓶。

    終止液終止液（（                ））

需要而未提供的試劑和器材需要而未提供的試劑和器材

需要而未提供的試劑和器材需要而未提供的試劑和器材

1.  標(biāo)準(zhǔn)規(guī)格酶標(biāo)儀

2.  高速離心機(jī)

3.  電熱恒溫培養(yǎng)箱

4.  干凈的試管和Eppendof 管

5.  系列可調(diào)節(jié)移液器及吸頭，一次檢測樣品較多時，用多通道移液器

6.  蒸餾水，容量瓶等

標(biāo)本的采集及保存標(biāo)本的采集及保存

標(biāo)本的采集及保存標(biāo)本的采集及保存

1.  血清：全血標(biāo)本請于室溫放置2 小時或4℃過夜后于1000g 離心20 分鐘，

    取上清即可立即檢測；或進(jìn)行分裝，并將標(biāo)本放于-20℃或-80℃保存，但

    應(yīng)避免反復(fù)凍融。解凍后的樣品應(yīng)再次離心，然后檢測。

2.  血漿：可用EDTA 或肝素作為抗凝劑，標(biāo)本采集后30 分鐘內(nèi)于2   -   8°C

    1000 g 離心15 分鐘，取上清即可立即檢測；或進(jìn)行分裝，并將標(biāo)本放于

    -20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。解凍后的樣品應(yīng)再次離心，然后

    檢測。

注：注：標(biāo)本溶血會影響zui后檢測結(jié)果標(biāo)本溶血會影響zui后檢測結(jié)果，因此溶血標(biāo)本不宜進(jìn)行此項(xiàng)檢測，因此溶血標(biāo)本不宜進(jìn)行此項(xiàng)檢測。。

注注：：標(biāo)本溶血會影響zui后檢測結(jié)果標(biāo)本溶血會影響zui后檢測結(jié)果，，因此溶血標(biāo)本不宜進(jìn)行此項(xiàng)檢測因此溶血標(biāo)本不宜進(jìn)行此項(xiàng)檢測。。

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標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋原則標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋原則：：2 瓶，使用前于6000-10000rpm 離心30 秒。每

標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋原則標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋原則：：

瓶臨用前以樣品稀釋液稀釋至1ml，蓋好后靜置10 分鐘以上，然后反復(fù)顛倒

/搓動以助溶解，其濃度為1000   pg/ml，做系列倍比稀釋后，分別稀釋1000

pg/ml, 500 pg/ml, 250 pg/ml, 125 pg/ml, 62.5 pg/ml, 31.2pg/ml, 15.6 pg/ml，

樣品稀釋液直接作為標(biāo)準(zhǔn)濃度0   pg/ml，臨用前15 分鐘內(nèi)配制，用完丟棄，

下次檢測使用新鮮配置的標(biāo)準(zhǔn)品。

如配制500 pg/ml 標(biāo)準(zhǔn)品：取0.5ml  （不要少于0.5ml）1000 pg/ml 的上述標(biāo)

準(zhǔn)品加入含0.5ml 樣品稀釋液的Eppendorf 管中，混勻即可，其余濃度以此

類推。

*標(biāo)記抗體的稀釋原則*標(biāo)記抗體的稀釋原則：：

*標(biāo)記抗體的稀釋原則*標(biāo)記抗體的稀釋原則：：

打開瓶蓋前請離心，收集瓶壁上的溶液。臨用前以*標(biāo)記抗體稀釋液稀

釋，稀釋前根據(jù)預(yù)先計算好的每次實(shí)驗(yàn)所需的總量配制 （每孔100l），實(shí)際

配制時應(yīng)多配制0.1-0.2ml。如10l *標(biāo)記抗體加990l *標(biāo)記抗體

稀釋液的比例配制，輕輕混勻，在使用前一小時內(nèi)配制。

辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素的稀釋原則辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素的稀釋原則：：

辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素的稀釋原則辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素的稀釋原則：：

打開瓶蓋前請離心，收集瓶壁上的溶液。臨用前以辣根過氧化物酶標(biāo)記親和

素稀釋液稀釋，稀釋前根據(jù)預(yù)先計算好的每次實(shí)驗(yàn)所需的總量配制（每孔

100l），實(shí)際配制時應(yīng)多配制0.1-0.2ml。如10l 辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素

加990l 辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素稀釋液的比例配制，輕輕混勻，在使用

前一小時內(nèi)配制。

操作步驟操作步驟

操作步驟操作步驟

實(shí)驗(yàn)開始前，請?zhí)崆芭渲煤盟性噭噭┗驑悠废♂寱r，均需混勻，混勻

時盡量避免起泡。每次檢測都應(yīng)該做標(biāo)準(zhǔn)曲線。如樣品濃度過高時，用樣品

稀釋液進(jìn)行稀釋，以使樣品符合試劑盒的檢測范圍。加樣時，槍頭應(yīng)直接對

準(zhǔn)液面，切勿沿孔壁加樣。

1   加樣：分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔。空白孔加樣品稀釋液100l，

    余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測樣品100l，注意不要有氣泡，加樣將樣品加于

    酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻，酶標(biāo)板加上蓋或覆膜，

    37℃反應(yīng)120 分鐘。

    為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效性，每次實(shí)驗(yàn)請使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。

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2   棄去液體，甩干，不用洗滌。每孔加*標(biāo)記抗體工作液 100l （取1l

    *標(biāo)記抗體加99l *標(biāo)記抗體稀釋液的比例配制，輕輕混勻，

    在使用前一小時內(nèi)配制），37℃,60 分鐘。

3   溫育60 分鐘后，棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板3 次，每次浸泡1-2 分鐘，

    200l/每孔，甩干。

4   每孔加辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素工作液 （同*標(biāo)記抗體工作液）

    100l，37℃，60 分鐘。

5   溫育60 分鐘后，棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板5 次，每次浸泡1-2 分鐘，

    200l/每孔，甩干。

6   依序每孔加底物溶液90l，37℃避光顯色（（30 分鐘內(nèi)，此時肉眼可見標(biāo)

                                                （（

    準(zhǔn)品的前3-4 孔有明顯的梯度藍(lán)色，后3-4 孔顯色不明顯，即可終止）。

7   依序每孔加終止溶液50l，終止反應(yīng)（此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。終止液的加

    入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性，底

    物反應(yīng)時間到后應(yīng)盡快加入終止液。

8   用酶聯(lián)儀在450nm 波長依序測量各孔的光密度 （OD 值）。 在加終止液

    后15 分鐘以內(nèi)進(jìn)行檢測。

實(shí)驗(yàn)備注實(shí)驗(yàn)備注

實(shí)驗(yàn)備注實(shí)驗(yàn)備注

1.  用戶在初次使用試劑盒時，應(yīng)將各種試劑管離心數(shù)分鐘，以便試劑集中到

    管底。

2.  每次實(shí)驗(yàn)留一孔作為空白調(diào)零孔，該孔不加任何試劑，只是zui后加底物溶

    液及終止液。測量時先用此孔調(diào)OD 值至零。

3.  為防止樣品蒸發(fā)，試驗(yàn)時將反應(yīng)板放于鋪有濕布的密閉盒內(nèi)，酶標(biāo)板加上

    蓋或覆膜。

4.  未使用完的酶標(biāo)板或者試劑，請于2-8℃保存。標(biāo)準(zhǔn)品、*標(biāo)記抗體

    工作液、辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素工作液請依據(jù)所需的量配置使用。請

    勿重復(fù)使用已稀釋過的標(biāo)準(zhǔn)品、*標(biāo)記抗體工作液、或辣根過氧化物

    酶標(biāo)記親和素工作液。

5.  建議檢測樣品時均設(shè)雙孔測定，以保證檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。

洗板方法洗板方法

洗板方法洗板方法

手工洗板方法：吸去（不可觸及板壁）或甩掉酶標(biāo)板內(nèi)的液體；在實(shí)驗(yàn)臺上

鋪墊幾層吸水紙，酶標(biāo)板朝下用力拍幾次；將推薦的洗滌緩沖液至少0.3ml

注入孔內(nèi)，浸泡1-2 分鐘。根據(jù)需要，重復(fù)此過程數(shù)次。

 自動洗板：如果有自動洗板機(jī)，應(yīng)在熟練使用后再用到正式實(shí)驗(yàn)過程中。

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計算計算

計算計算

請從我們的下載專業(yè)軟件"Curve Exert 1.3"，并根據(jù)提示制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。

以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)（對數(shù)坐標(biāo)），OD 值為縱坐標(biāo)（普通坐標(biāo)），在半對

數(shù)坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)樣品的OD 值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度；

再乘以稀釋倍數(shù)；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD 值計算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方

程式，將樣品的OD 值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即

為樣品的實(shí)際濃度。

注意事項(xiàng)注意事項(xiàng)

注意事項(xiàng)注意事項(xiàng)

1.  本操作說明適用于本操作說明適用于48T 試劑盒試劑盒，， 48T 試劑盒中酶聯(lián)板試劑盒中酶聯(lián)板、標(biāo)準(zhǔn)品、標(biāo)準(zhǔn)品、*、*

    本操作說明適用于本操作說明適用于        試劑盒試劑盒，，      試劑盒中酶聯(lián)板試劑盒中酶聯(lián)板、、標(biāo)準(zhǔn)品標(biāo)準(zhǔn)品、、**

    標(biāo)記抗體及辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素減半標(biāo)記抗體及辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素減半。。

    標(biāo)記抗體及辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素減半標(biāo)記抗體及辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素減半。。

2.  當(dāng)混合蛋白溶液時應(yīng)盡量輕緩，避免起泡。

3.  洗滌過程非常重要，不充分的洗滌易造成假陽性。

4.  一次加樣時間控制在5 分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。

5.  請每次測定的同時做標(biāo)準(zhǔn)曲線，做復(fù)孔。

6.  如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高，請先稀釋后再測定，計算時請zui后乘以稀釋

    倍數(shù)。

7.  在配制標(biāo)準(zhǔn)品、檢測溶液工作液時，請以相應(yīng)的稀釋液配制，不能混淆。

8.  底物請避光保存。

9.  不要用其它生產(chǎn)廠家的試劑替換試劑盒中的試劑。

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Notes

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