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閱讀：298發(fā)布時間：2011-8-24
（TPA）人組織多肽抗原（TPA）Elisa試劑盒說明書
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人組織多肽抗原人組織多肽抗原（TPA）酶聯(lián)免疫分析酶聯(lián)免疫分析
人組織多肽抗原人組織多肽抗原 酶聯(lián)免疫分析酶聯(lián)免疫分析
試劑盒使用說明書試劑盒使用說明書
試劑盒使用說明書試劑盒使用說明書
本試劑盒僅供研究使用本試劑盒僅供研究使用
本試劑盒僅供研究使用本試劑盒僅供研究使用
產(chǎn)品編號產(chǎn)品編號：：CSB-E04780h
產(chǎn)品編號產(chǎn)品編號：：
檢測范圍檢測范圍：：3.12 mU/ml - 200 mU/ml
檢測范圍檢測范圍：：
zui低檢測限zui低檢測限：：0.78 mU/ml
zui低檢測限zui低檢測限：：
特異性特異性：：本試劑盒可同時檢測天然或重組的人TPA，且與其他相關(guān)蛋白無
特異性特異性：：
交叉反應(yīng)。
有效期有效期：：6 個月
有效期有效期：：
預(yù)期應(yīng)用預(yù)期應(yīng)用：：ELISA 法定量測定人血清、血漿或其它相關(guān)生物液體中TPA
預(yù)期應(yīng)用預(yù)期應(yīng)用：：
含量。
說明說明
說明說明
1. 試劑盒保存：未開封的試劑盒應(yīng)儲存于2-8℃；開封后的酶標(biāo)板應(yīng)與干燥
劑一起儲存于鋁箔袋中置于2-8℃保存。僅在此出儲存條件下，產(chǎn)品在有
效期內(nèi)可正常使用。
2. 濃洗滌液低溫保存會有鹽析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶。
3. 中、英文說明書可能會有不一致之處，請以英文說明書為準(zhǔn)。
4. 剛開啟的酶聯(lián)板孔中可能會含有少許水樣物質(zhì)，此為正常現(xiàn)象，不會對實
驗結(jié)果造成任何影響。
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實驗原理實驗原理
實驗原理實驗原理
用純化的抗體包被微孔板，制成固相載體，往包被抗TPA 抗體的微孔中
依次加入標(biāo)本或標(biāo)準(zhǔn)品、*化的抗TPA 抗體、HRP 標(biāo)記的親和素，經(jīng)過
*洗滌后用底物TMB 顯色。TMB 在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并
在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的TPA 呈正相關(guān)。用
酶標(biāo)儀在450nm 波長下測定吸光度 （OD 值），計算樣品濃度。
試劑盒組成及試劑配制試劑盒組成及試劑配制
試劑盒組成及試劑配制試劑盒組成及試劑配制
1. 酶聯(lián)板酶聯(lián)板（Assay plate ）： 一塊（96 孔）。
酶聯(lián)板酶聯(lián)板
2. 標(biāo)準(zhǔn)品標(biāo)準(zhǔn)品（Standard）： 2 瓶（凍干品）。
標(biāo)準(zhǔn)品標(biāo)準(zhǔn)品
3. 樣品稀釋液樣品稀釋液（Sample Diluent）： 1×20ml/瓶。
樣品稀釋液樣品稀釋液
4. *標(biāo)記抗體稀釋液*標(biāo)記抗體稀釋液（（Biotin-antibody Diluent）：） 1×10ml/瓶。
*標(biāo)記抗體稀釋液*標(biāo)記抗體稀釋液（（ ））
5. 辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素稀釋液辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素稀釋液（（HRP-avidin Diluent）） 1×10ml/瓶。
辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素稀釋液辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素稀釋液（（ ））
6. *標(biāo)記抗體*標(biāo)記抗體（（Biotin-antibody）：） 1×120μl/瓶（1：100）。
*標(biāo)記抗體*標(biāo)記抗體（（ ））
7. 辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素（（HRP-avidin）：） 1×120μl/瓶（1：100）。
辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素（（ ））
8. 底物溶液底物溶液（（TMB Substrate）：） 1×10ml/瓶。
底物溶液底物溶液（（ ））
9. 濃洗滌液濃洗滌液（（Wash Buffer ）） 1×20ml/瓶，使用時每瓶用蒸餾水稀釋25 倍。
濃洗滌液濃洗滌液（（ ））
10. 終止液終止液（（Stop Solution）：） 1×10ml/瓶。
終止液終止液（（ ））
需要而未提供的試劑和器材需要而未提供的試劑和器材
需要而未提供的試劑和器材需要而未提供的試劑和器材
1. 標(biāo)準(zhǔn)規(guī)格酶標(biāo)儀
2. 高速離心機(jī)
3. 電熱恒溫培養(yǎng)箱
4. 干凈的試管和Eppendof 管
5. 系列可調(diào)節(jié)移液器及吸頭，一次檢測樣品較多時，用多通道移液器
6. 蒸餾水，容量瓶等
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標(biāo)本的采集及保存標(biāo)本的采集及保存
標(biāo)本的采集及保存標(biāo)本的采集及保存
1. 血清：全血標(biāo)本請于室溫放置2 小時或4℃過夜后于1000g 離心20 分鐘，
取上清即可立即檢測；或進(jìn)行分裝，并將標(biāo)本放于-20℃或-80℃保存，但
應(yīng)避免反復(fù)凍融。解凍后的樣品應(yīng)再次離心，然后檢測。
2. 血漿：可用EDTA 或肝素作為抗凝劑，標(biāo)本采集后30 分鐘內(nèi)于2 - 8°C
1000 g 離心15 分鐘，取上清即可立即檢測；或進(jìn)行分裝，并將標(biāo)本放于
-20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。解凍后的樣品應(yīng)再次離心，然后
檢測。
3. 細(xì)胞培養(yǎng)物上清或其它生物標(biāo)本：1000g 離心20 分鐘，取上清即可立即
檢測；或進(jìn)行分裝，并將標(biāo)本放于-20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
解凍后的樣品應(yīng)再次離心，然后檢測。
注：注：標(biāo)本溶血會影響zui后檢測結(jié)果標(biāo)本溶血會影響zui后檢測結(jié)果，因此溶血標(biāo)本不宜進(jìn)行此項檢測，因此溶血標(biāo)本不宜進(jìn)行此項檢測。。
注注：：標(biāo)本溶血會影響zui后檢測結(jié)果標(biāo)本溶血會影響zui后檢測結(jié)果，，因此溶血標(biāo)本不宜進(jìn)行此項檢測因此溶血標(biāo)本不宜進(jìn)行此項檢測。。
標(biāo)本的稀釋原則標(biāo)本的稀釋原則：：
標(biāo)本的稀釋原則標(biāo)本的稀釋原則：：
首先通過文獻(xiàn)檢索的方式了解待測樣本的大致含量，確定適當(dāng)?shù)南♂尡稊?shù)。
只有稀釋至標(biāo)準(zhǔn)曲線的范圍內(nèi)，檢測的結(jié)果才是準(zhǔn)確的。稀釋的過程中，應(yīng)
做好詳細(xì)的記錄。zui后計算濃度時，稀釋了“N”倍，標(biāo)本的濃度應(yīng)再乘以“N”。
標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋原則標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋原則：：2 瓶，使用前于6000-10000rpm 離心30 秒。每
標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋原則標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋原則：：
瓶臨用前以樣品稀釋液稀釋至1ml，蓋好后靜置10 分鐘以上，然后反復(fù)顛倒
/搓動以助溶解，其濃度為200 mU/ml，做系列倍比稀釋后，分別稀釋200
mU/ml, 100 mU/ml, 50 mU/ml, 25 mU/ml, 12.5 mU/ml, 6.25 mU/ml, 3.12
mU/ml，樣品稀釋液直接作為標(biāo)準(zhǔn)濃度0 mU/ml，臨用前15 分鐘內(nèi)配制，用
完丟棄，下次檢測使用新鮮配置的標(biāo)準(zhǔn)品。
如配制100 mU/ml 標(biāo)準(zhǔn)品：取0.5ml （不要少于0.5ml）200 mU/ml 的上述
標(biāo)準(zhǔn)品加入含0.5ml 樣品稀釋液的Eppendorf 管中，混勻即可，其余濃度以
此類推。
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*標(biāo)記抗體的稀釋原則*標(biāo)記抗體的稀釋原則：：
*標(biāo)記抗體的稀釋原則*標(biāo)記抗體的稀釋原則：：
打開瓶蓋前請離心，收集瓶壁上的溶液。臨用前以*標(biāo)記抗體稀釋液稀
釋，稀釋前根據(jù)預(yù)先計算好的每次實驗所需的總量配制（每孔100μl），實際
配制時應(yīng)多配制0.1-0.2ml。如10μl *標(biāo)記抗體加990μl *標(biāo)記抗體
稀釋液的比例配制，輕輕混勻，在使用前一小時內(nèi)配制。
辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素的稀釋原則辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素的稀釋原則：：
辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素的稀釋原則辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素的稀釋原則：：
打開瓶蓋前請離心，收集瓶壁上的溶液。臨用前以辣根過氧化物酶標(biāo)記親和
素稀釋液稀釋，稀釋前根據(jù)預(yù)先計算好的每次實驗所需的總量配制（每孔
100μl），實際配制時應(yīng)多配制0.1-0.2ml。如10μl 辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素
加990μl 辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素稀釋液的比例配制，輕輕混勻，在使用
前一小時內(nèi)配制。
操作步操作步驟驟
操作步操作步驟驟
實驗開始前，請?zhí)崆芭渲煤盟性噭噭┗驑悠废♂寱r，均需混勻，混勻
時盡量避免起泡。每次檢測都應(yīng)該做標(biāo)準(zhǔn)曲線。如樣品濃度過高時，用樣品
稀釋液進(jìn)行稀釋，以使樣品符合試劑盒的檢測范圍。加樣時，槍頭應(yīng)直接對
準(zhǔn)液面，切勿沿孔壁加樣。
1. 加樣：分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔。空白孔加樣品稀釋液100μl，
余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測樣品100μl，注意不要有氣泡，加樣將樣品加于
酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻，酶標(biāo)板加上蓋或覆膜，
37℃反應(yīng)120 分鐘。
為保證實驗結(jié)果有效性，每次實驗請使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。
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2. 棄去液體，甩干，不用洗滌。每孔加*標(biāo)記抗體工作液 100μl （取1μl
*標(biāo)記抗體加99μl *標(biāo)記抗體稀釋液的比例配制，輕輕混勻，
在使用前一小時內(nèi)配制），37℃,60 分鐘。
3. 溫育60 分鐘后，棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板3 次，每次浸泡1-2 分鐘，
200μl/每孔，甩干。
4. 每孔加辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素工作液 （同*標(biāo)記抗體工作液）
100μl，37℃，60 分鐘。
5. 溫育60 分鐘后，棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板5 次，每次浸泡1-2 分鐘，
200μl/每孔，甩干。
6. 依序每孔加底物溶液90μl，37℃避光顯色 （（30 分鐘內(nèi)，此時肉眼可見標(biāo)
（（
準(zhǔn)品的前3-4 孔有明顯的梯度藍(lán)色，后3-4 孔顯色不明顯，即可終止）。
7. 依序每孔加終止溶液50μl，終止反應(yīng)（此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。終止液的加
入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性，底
物反應(yīng)時間到后應(yīng)盡快加入終止液。
8. 用酶聯(lián)儀在450nm 波長依序測量各孔的光密度 （OD 值）。 在加終止液
后15 分鐘以內(nèi)進(jìn)行檢測。
實驗備注實驗備注
實驗備注實驗備注
1. 用戶在初次使用試劑盒時，應(yīng)將各種試劑管離心數(shù)分鐘，以便試劑集中到
管底。
2. 每次實驗留一孔作為空白調(diào)零孔，該孔不加任何試劑，只是zui后加底物溶
液及終止液。測量時先用此孔調(diào)OD 值至零。
3. 為防止樣品蒸發(fā)，試驗時將反應(yīng)板放于鋪有濕布的密閉盒內(nèi)，酶標(biāo)板加上
蓋或覆膜。
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4. 未使用完的酶標(biāo)板或者試劑，請于2-8℃保存。標(biāo)準(zhǔn)品、*標(biāo)記抗體
工作液、辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素工作液請依據(jù)所需的量配置使用。請
勿重復(fù)使用已稀釋過的標(biāo)準(zhǔn)品、*標(biāo)記抗體工作液、或辣根過氧化物
酶標(biāo)記親和素工作液。
5. 建議檢測樣品時均設(shè)雙孔測定，以保證檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。
洗板方法洗板方法
洗板方法洗板方法
手工洗板方法：吸去（不可觸及板壁）或甩掉酶標(biāo)板內(nèi)的液體；在實驗臺上
鋪墊幾層吸水紙，酶標(biāo)板朝下用力拍幾次；將推薦的洗滌緩沖液至少0.3ml
注入孔內(nèi)，浸泡1-2 分鐘。根據(jù)需要，重復(fù)此過程數(shù)次。
自動洗板：如果有自動洗板機(jī)，應(yīng)在熟練使用后再用到正式實驗過程中。
計算計算
計算計算
請從我們的下載專業(yè)軟件"Curve Exert 1.3"，并根據(jù)提示制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。
以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)（對數(shù)坐標(biāo)），OD 值為縱坐標(biāo)（普通坐標(biāo)），在半對
數(shù)坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)樣品的OD 值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度；
再乘以稀釋倍數(shù)；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD 值計算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方
程式，將樣品的OD 值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即
為樣品的實際濃度。
注意注意事項事項
注意注意事項事項
1. 本操作說明適用于本操作說明適用于48T 試劑盒試劑盒，， 48T 試劑盒中酶聯(lián)板試劑盒中酶聯(lián)板、標(biāo)準(zhǔn)品、標(biāo)準(zhǔn)品、*、*
本操作說明適用于本操作說明適用于 試劑盒試劑盒，， 試劑盒中酶聯(lián)板試劑盒中酶聯(lián)板、、標(biāo)準(zhǔn)品標(biāo)準(zhǔn)品、、**
標(biāo)記抗體及辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素減半標(biāo)記抗體及辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素減半。。
標(biāo)記抗體及辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素減半標(biāo)記抗體及辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素減半。。
2. 當(dāng)混合蛋白溶液時應(yīng)盡量輕緩，避免起泡。
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3. 洗滌過程非常重要，不充分的洗滌易造成假陽性。
4. 一次加樣時間控制在5 分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。
5. 請每次測定的同時做標(biāo)準(zhǔn)曲線，做復(fù)孔。
6. 如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高，請先稀釋后再測定，計算時請zui后乘以稀釋
倍數(shù)。
7. 在配制標(biāo)準(zhǔn)品、檢測溶液工作液時，請以相應(yīng)的稀釋液配制，不能混淆。
8. 底物請避光保存。
9. 不要用其它生產(chǎn)廠家的試劑替換試劑盒中的試劑。
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