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（OPG） 小鼠骨保護(hù)素（OPG）ELISA試劑盒
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小鼠小鼠骨保護(hù)素骨保護(hù)素（OPG）酶聯(lián)免疫分析酶聯(lián)免疫分析
小鼠小鼠骨保護(hù)素骨保護(hù)素 酶聯(lián)免疫分析酶聯(lián)免疫分析
試劑盒使用說明書試劑盒使用說明書
試劑盒使用說明書試劑盒使用說明書
本試劑盒僅供研究使用本試劑盒僅供研究使用
本試劑盒僅供研究使用本試劑盒僅供研究使用
產(chǎn)品編號(hào)產(chǎn)品編號(hào)：：CSB-E04693m
產(chǎn)品編號(hào)產(chǎn)品編號(hào)：：
檢測范圍檢測范圍：：78 pg/ml - 5000 pg/ml
檢測范圍檢測范圍：：
zui低檢測限zui低檢測限：：19.5 pg/ml
zui低檢測限zui低檢測限：：
特異性特異性：本試劑盒可同時(shí)檢測天然或重組的： 小鼠OPG，且與其他相關(guān)蛋白無交叉反應(yīng)。
特異性特異性：：
有效期有效期：：6 個(gè)月
有效期有效期：：
預(yù)期應(yīng)用預(yù)期應(yīng)用：：ELISA 法定量測定小鼠血清、血漿、細(xì)胞培養(yǎng)上清或其它相關(guān)生物液體中OPG
預(yù)期應(yīng)用預(yù)期應(yīng)用：：
含量。
說明說明
說明說明
1．試劑盒保存：-20℃（較長時(shí)間不用時(shí)）；2-8℃（頻繁使用時(shí)）。
2．濃洗滌液低溫保存會(huì)有鹽析出，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶。
3．中、英文說明書可能會(huì)有不一致之處，請以英文說明書為準(zhǔn)。
4．剛開啟的酶聯(lián)板孔中可能會(huì)含有少許水樣物質(zhì)，此為正?，F(xiàn)象，不會(huì)對實(shí)驗(yàn)結(jié)果造
成任何影響。
實(shí)驗(yàn)原理實(shí)驗(yàn)原理
實(shí)驗(yàn)原理實(shí)驗(yàn)原理
用純化的抗體包被微孔板，制成固相載體，往包被抗OPG 抗體的微孔中依次加入標(biāo)本
或標(biāo)準(zhǔn)品、*化的抗OPG 抗體、HRP 標(biāo)記的親和素，經(jīng)過*洗滌后用底物TMB 顯
色。TMB 在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的
深淺和樣品中的OPG 呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），計(jì)算樣品
濃度。
試劑盒組成及試劑配制試劑盒組成及試劑配制
試劑盒組成及試劑配制試劑盒組成及試劑配制
1. 酶聯(lián)板酶聯(lián)板（Assay plate ）：一塊（96 孔）。
酶聯(lián)板酶聯(lián)板
2. 標(biāo)準(zhǔn)品標(biāo)準(zhǔn)品 （Standard）：2 瓶（凍干品）。
標(biāo)準(zhǔn)品標(biāo)準(zhǔn)品
3. 樣品稀釋液樣品稀釋液（Sample Diluent）：1×20ml/瓶。
樣品稀釋液樣品稀釋液
4. *標(biāo)記抗體稀釋液*標(biāo)記抗體稀釋液（（Biotin-antibody Diluent）：）1×10ml/瓶。
*標(biāo)記抗體稀釋液*標(biāo)記抗體稀釋液（（ ））
5. 辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素稀釋液辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素稀釋液 （（HRP-avidin Diluent）：）1×10ml/瓶。
辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素稀釋液辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素稀釋液 （（ ））
6. *標(biāo)記抗體*標(biāo)記抗體（（Biotin-antibody）：）1×120μl/瓶（1：100）
*標(biāo)記抗體*標(biāo)記抗體（（ ））
7. 辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素 （（HRP-avidin）：）1×120μl/瓶（1：100）
辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素 （（ ））
8. 底物溶液底物溶液 （（TMB Substrate）：）1×10ml/瓶。
底物溶液底物溶液 （（ ））
9. 濃洗滌液濃洗滌液 （（Wash Buffer）：）1×20ml/瓶，使用時(shí)每瓶用蒸餾水稀釋25 倍。
濃洗滌液濃洗滌液 （（ ））
10. 終止液終止液（（Stop Solution）：）1×10ml/瓶（2N H SO4）。
終止液終止液（（ ）） 2
需要而未提供的試劑和器材需要而未提供的試劑和器材
需要而未提供的試劑和器材需要而未提供的試劑和器材
1. 標(biāo)準(zhǔn)規(guī)格酶標(biāo)儀
2. 高速離心機(jī)
3. 電熱恒溫培養(yǎng)箱
4. 干凈的試管和Eppendof 管
5. 系列可調(diào)節(jié)移液器及吸頭，一次檢測樣品較多時(shí)，用多通道移液器
6. 蒸餾水，容量瓶等
標(biāo)本的采集及保存標(biāo)本的采集及保存
標(biāo)本的采集及保存標(biāo)本的采集及保存
1. 血清：全血標(biāo)本請于室溫放置2 小時(shí)或4℃過夜后于1000g 離心20 分鐘，取上清即可
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檢測，或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
2. 血漿：可用EDTA 或肝素作為抗凝劑，標(biāo)本采集后30 分鐘內(nèi)于2 - 8°C 1000 g 離心15
分鐘，或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
3. 細(xì)胞培養(yǎng)物上清或其它生物標(biāo)本：1000g 離心20 分鐘，取上清即可檢測，或?qū)?biāo)本放
于-20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
注：注：標(biāo)本溶血會(huì)影響zui后檢測結(jié)果標(biāo)本溶血會(huì)影響zui后檢測結(jié)果，因此溶血標(biāo)本不宜進(jìn)行此項(xiàng)檢測，因此溶血標(biāo)本不宜進(jìn)行此項(xiàng)檢測。。
注注：：標(biāo)本溶血會(huì)影響zui后檢測結(jié)果標(biāo)本溶血會(huì)影響zui后檢測結(jié)果，，因此溶血標(biāo)本不宜進(jìn)行此項(xiàng)檢測因此溶血標(biāo)本不宜進(jìn)行此項(xiàng)檢測。。
標(biāo)本的稀釋原則標(biāo)本的稀釋原則：：
標(biāo)本的稀釋原則標(biāo)本的稀釋原則：：
首先通過文獻(xiàn)檢索的方式了解待測樣本的大致含量，確定適當(dāng)?shù)南♂尡稊?shù)。只有稀釋至標(biāo)準(zhǔn)
曲線的范圍內(nèi)，檢測的結(jié)果才是準(zhǔn)確的。稀釋的過程中，應(yīng)做好詳細(xì)的記錄。zui后計(jì)算濃度
時(shí)，稀釋了“N”倍，標(biāo)本的濃度應(yīng)再乘以“N”。
標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋原則標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋原則：：2 瓶，每瓶臨用前以樣品稀釋液稀釋至1ml，蓋好后靜置10 分鐘以上，
標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋原則標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋原則：：
然后反復(fù)顛倒/搓動(dòng)以助溶解，其濃度為5000 pg/ml，做系列倍比稀釋后，分別稀釋5000
pg/ml，2500 pg/ml，1250 pg/ml，625 pg/ml，312 pg/ml，156 pg/ml，78 pg/ml，樣品稀釋液
直接作為標(biāo)準(zhǔn)濃度0 pg/ml，臨用前15 分鐘內(nèi)配制。
如配制2500 pg/ml 標(biāo)準(zhǔn)品：取0.5ml （不要少于0.5ml）5000 pg/ml 的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含0.5ml
樣品稀釋液的Eppendorf 管中，混勻即可，其余濃度以此類推。
*標(biāo)記抗體*標(biāo)記抗體的稀釋原則的稀釋原則：：
*標(biāo)記抗體*標(biāo)記抗體的稀釋原則的稀釋原則：：
臨用前以*標(biāo)記抗體稀釋液稀釋，稀釋前根據(jù)預(yù)先計(jì)算好的每次實(shí)驗(yàn)所需的總量配制
（每孔100μl），實(shí)際配制時(shí)應(yīng)多配制0.1-0.2ml。如10μl *標(biāo)記抗體加990μl *標(biāo)
記抗體稀釋液的比例配制，輕輕混勻，在使用前一小時(shí)內(nèi)配制。
辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素的稀釋原則的稀釋原則：：
辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素的稀釋原則的稀釋原則：：
臨用前以辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素稀釋液稀釋，稀釋前根據(jù)預(yù)先計(jì)算好的每次實(shí)驗(yàn)所需的
總量配制（每孔100μl），實(shí)際配制時(shí)應(yīng)多配制0.1-0.2ml。如10μl 辣根過氧化物酶標(biāo)記親和
素加990μl 辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素稀釋液的比例配制，輕輕混勻，在使用前一小時(shí)內(nèi)
配制。
操作步驟操作步驟
操作步驟操作步驟
實(shí)驗(yàn)開始前，請?zhí)崆芭渲煤盟性噭?，試劑或樣品稀釋時(shí)，均需混勻，混勻時(shí)盡量避免起泡。
每次檢測都應(yīng)該做標(biāo)準(zhǔn)曲線。如樣品濃度過高時(shí)，用樣品稀釋液進(jìn)行稀釋，以使樣品符合試
劑盒的檢測范圍。
1. 加樣：分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔?？瞻卓准訕悠废♂屢?00μl，余孔分別加
標(biāo)準(zhǔn)品或待測樣品100μl，注意不要有氣泡，加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸
及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻，酶標(biāo)板加上蓋或覆膜，37℃反應(yīng)120 分鐘。
為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效性，每次實(shí)驗(yàn)請使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。
2. 棄去液體，甩干，不用洗滌。每孔加*標(biāo)記抗體工作液 100μl （取1μl *標(biāo)記
抗體加99μl *標(biāo)記抗體稀釋液的比例配制，輕輕混勻，在使用前一小時(shí)內(nèi)配制），
37℃,60 分鐘。
3. 溫育60 分鐘后，棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板3 次，每次浸泡1-2 分鐘，200μl/每孔，甩
干。
4. 每孔加辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素工作液 （同*標(biāo)記抗體工作液） 100μl，37℃，
60 分鐘。
5. 溫育60 分鐘后，棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板5 次，每次浸泡1-2 分鐘，200μl/每孔，甩
干。
6. 依序每孔加底物溶液90μl，37℃避光顯色 （（30 分鐘內(nèi)，此時(shí)肉眼可見標(biāo)準(zhǔn)品的前3-4
（（
孔有明顯的梯度藍(lán)色，后3-4 孔顯色不明顯，即可終止）。
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7. 依序每孔加終止溶液50μl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。終止液的加入順序應(yīng)盡量
與底物液的加入順序相同。為了保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性，底物反應(yīng)時(shí)間到后應(yīng)盡快加入
終止液。
8. 用酶聯(lián)儀在450nm 波長依序測量各孔的光密度 （OD 值）。 在加終止液后15 分鐘以內(nèi)
進(jìn)行檢測。
注：注
注注
1. 用戶在初次使用試劑盒時(shí)，應(yīng)將各種試劑管離心數(shù)分鐘，以便試劑集中到管底。
2. 每次實(shí)驗(yàn)留一孔作為空白調(diào)零孔，該孔不加任何試劑，只是zui后加底物溶液及2N H SO4。
2
測量時(shí)先用此孔調(diào)OD 值至零。
3. 為防止樣品蒸發(fā)，試驗(yàn)時(shí)將反應(yīng)板放于鋪有濕布的密閉盒內(nèi)，酶標(biāo)板加上蓋或覆膜。
4. 未使用完的酶標(biāo)板或者試劑，請于2-8℃保存。標(biāo)準(zhǔn)品、*標(biāo)記抗體工作液、辣根過
氧化物酶標(biāo)記親和素工作液請依據(jù)所需的量配置使用。請勿重復(fù)使用已稀釋過的標(biāo)準(zhǔn)
品、*標(biāo)記抗體工作液、或辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素工作液。
5. 建議檢測樣品時(shí)均設(shè)雙孔測定，以保證檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。
洗板方法洗板方法
洗板方法洗板方法
手工洗板方法：吸去（不可觸及板壁）或甩掉酶標(biāo)板內(nèi)的液體；在實(shí)驗(yàn)臺(tái)上鋪墊幾層吸水紙，
酶標(biāo)板朝下用力拍幾次；將推薦的洗滌緩沖液至少0.3ml 注入孔內(nèi)，浸泡1-2 分鐘。根據(jù)需
要，重復(fù)此過程數(shù)次。
自動(dòng)洗板：如果有自動(dòng)洗板機(jī)，應(yīng)在熟練使用后再用到正式實(shí)驗(yàn)過程中。
計(jì)算計(jì)算
計(jì)算計(jì)算
以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)（對數(shù)坐標(biāo)），OD 值為縱坐標(biāo)（普通坐標(biāo)），在半對數(shù)坐標(biāo)紙上繪
出標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)樣品的OD 值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標(biāo)準(zhǔn)物
的濃度與OD 值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD 值代入方程式，計(jì)算出樣
品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實(shí)際濃度。
注意事項(xiàng)注意事項(xiàng)
注意事項(xiàng)注意事項(xiàng)
1. 當(dāng)混合蛋白溶液時(shí)應(yīng)盡量輕緩，避免起泡。
2. 洗滌過程非常重要，不充分的洗滌易造成假陽性。
3. 一次加樣時(shí)間控制在5 分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。
4. 請每次測定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線，做復(fù)孔。
5. 如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高，請先稀釋后再測定，計(jì)算時(shí)請zui后乘以稀釋倍數(shù)。
6. 在配制標(biāo)準(zhǔn)品、檢測溶液工作液時(shí)，請以相應(yīng)的稀釋液配制，不能混淆。
7. 底物請避光保存。
8. 不要用其它生產(chǎn)廠家的試劑替換試劑盒中的試劑。
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