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Human Growth Hormone（HGH）
ELISA KIT
 
 
 
 
Catalog No. CSB-E04567h
（96T）
 
 
 
 
 
 
 
  This immunoassay kit allows for the in vitro quantitative determination of human
HGH concentrations in serum, plasma and other biological fluids.
  Expiration date      six months from the date of manufacture
  FOR RESEARCH USE ONLY. NOT FOR USE IN DIAGNOSTIC PROCEDURES.
 
 
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INTRODUCTION
HGH  is  Human  Growth  Hormone,  a  natural  hormone  produced  in  the
pituitary gland of the brain. HGH is considered "the key" hormone because
it controls so many functions. It's responsible for youth, vitality, energy and
all  of  the  health  benefits  we  associate  with  youth.  Dr.  Daniel  Rudman's
study  in  the  New  England  Journal  Of  Medicine  demonstrated  the
remarkable ability to reverse the effects of aging upon the human body with
the  employment  of  HGH  -  Human  Growth  Hormone!  Due  in  part  to  his
efforts, Dr. Rudmans's study saw the effects of HGH upon overweight men
between the ages of 61 and 80 years of age.  
HGH reduces body fat The men did not alter their personal habits of eating,
smoking,  or  exercise,  yet  with  the  consumption  of  HGH,  they  lost  an
average of 14% of  their body  fat, while gaining an average of 8.8%  lean
muscle mass. Their skin became  firmer and  they experienced a  localized
increase in bone density. Over all, HgH appeared to reverse the effects of
aging by 10-20 years!!! HGH is prescribed and administered by a doctor in
the form of injections. But a nonprescription form is also available over the
counter and through mail order.  
HGH  promotes  growth  in  children  and  plays  an  important  role  in  adult
metabolism.  The  body  secretes  the  hormone,  in  decreasing  amounts,
throughout  our  lifetimes.  The  amount  of  hormone  in  the  body  can  be
measured by levels of IGF-1 （Insulin Growth Factor）. Growth hormone has 
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a profound effect on all the cells of the body, more than any other hormone
because it is the cell generator.  
HGH is the "master hormone" controlling many organs and body functions
and  is  directly  responsible  for  stimulating  tissue  repair,  cell  replacement,
brain  functions,  and  enzyme  function!  It’s  human  growth  hormone  that
grows the cells, bones, muscles, and organs, and it is the decreasing level
of human growth hormone after age 30 that slowly robs us of our "youth."  
PRINCIPLE OF THE ASSAY
The microtiter plate provided in this kit has been pre-coated with biotin-BSA
and  Avidin.  Standards  or  samples  are  then  added  to  the  appropriate
microtiter plate wells with a biotin-conjugated HGH antibody and incubated.
Then  Horseradish  Peroxidase  （HRP）-conjugated  antibody  preparation
specific for HGH are added and incubated. Substrate solutions are added to
each well. The enzyme-substrate reaction is terminated by the addition of a
sulphuric  acid  solution  and  the  color  change  is  measured
spectrophotometrically  at  a  wavelength  of  450  nm  ±  2  nm.  The
concentration of HGH in the samples is then determined by comparing the
O.D. of the samples to the standard curve.
DETECTION RANGE
2.5 ng/ml-50 ng/ml. The standard curve concentrations used for the ELISA’s
were 50 ng/ml, 25ng/ml,10 ng/ml, 5 ng/ml，2.5 ng/ml. 
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SPECIFICITY
This  assay  recognizes  human  HGH.  No  significant  cross-reactivity  or
interference was observed.
SENSITIVITY
The minimum detectable dose of human HGH is typically less than 1 ng/ml.
The sensitivity of this assay, or Lower Limit of Detection （LLD） was defined
as the lowest protein concentration that could be differentiated from zero.
MATERIALS PROVIDED
Reagent      Quantity
Assay plate  1
Standards （S1-S4）  5x 1 ml
Biotin-antibody  1 x 6 ml
HRP-conjugate  1 x 10 ml
Wash Buffer      
1 x 20 ml
（10×concentrate）  
Substrate A  1 x 7 ml
Substrate B  1 x 7 ml
Stop Solution      1 x 7 ml
 
Standard  Standard1  Standard2  Standard3  Standard4  Standard5
Concentration
（ng/ml）
2.5  5  10  25  50 
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STORAGE
1.  Unopened  test  kits  should  be  stored  at  2-8°C  upon  receipt  and  the
microtiter plate should be kept in a sealed bag. The test kit may be used
throughout the expiration date of the kit. Refer  to  the package  label for
the expiration date.
2.  Opened  test  kits  will  remain  stable  until  the  expiring  date  shown,
provided it is stored as prescribed above.    
3.  A  microtiter  plate  reader  with  a  bandwidth  of  10  nm  or  less  and  an
optical  density  range  of  0-3  OD  or  greater  at  450nm  wavelength  is
acceptable for use in absorbance measurement.
REAGENT PREPARATION
Bring all reagents to room temperature before use.  
1.  Wash Buffer    If crystals have  formed  in  the concentrate, warm up  to
room  temperature  and  mix  gently  until  the  crystals  have  compley
dissolved. Dilute 20 ml of Wash Buffer Concentrate  into deionized or
distilled water to prepare 200 ml of Wash Buffer.
Precaution: The Stop Solution provided with  this kit  is an acid solution. Wear
eye, hand, face, and clothing protection when using this material.
OTHER SUPPLIES REQUIRED
  Microplate  reader  capable  of measuring  absorbance  at  450  nm, with
the correction wavelength set at 540 nm or 570 nm.
  Pipettes and pipette tips.
  Deionized or distilled water.
  Squirt bottle, manifold dispenser, or automated microplate washer. 
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SAMPLE COLLECTION AND STORAGE
  Serum    Use a serum separator  tube （SST） and allow samples  to clot
for 30 minutes before centrifugation for 15 minutes at 1000 g. Remove
serum and assay  immediay or aliquot and store samples at  -20° C.
Avoid repeated freeze-thaw cycles.
  Plasma    Collect  plasma  using  citrate,  EDTA,  or  heparin  as  an
anticoagulant. Centrifuge for 15 minutes at 1000 g within 30 minutes of
collection. Assay  immediay  or  aliquot  and  store  samples  at  -20°C.
Avoid repeated freeze-thaw cycles.
Note: Grossly hemolyzed samples are not suitable for use in this assay.
ASSAY PROCEDURE
Bring  all  reagents  and  samples  to  room  temperature  before  use.  It  is
recommended that all samples, standards, and controls be assayed in duplicate.
1.  Add  50µl  of  Standard  or  Sample  per  well.  Then  add  50µl  of
Biotin-antibody  to  each  well.  Standards  need  test  in  duplicate. Mix
well and then incubate for 30 min at 37°C.  
2.  Fill each well with Wash Buffer （about 200µl）, stay for 10 seconds and
Spinning.  Repeat  the  process  for  a  total  of  three  washes.  Complete
removal of  liquid at each step  is essential  to good performance. After
the  last  wash,  remove  any  remaining Wash  Buffer  by  aspirating  or
decanting. Invert the plate and blot it against clean paper towels. 
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3.  Add 50µl of HRP-conjugate to each well. Mix well and then incubate for
30 min at 37°C.  
4.  Wash the plate as before.
5.  Add 50µl of Substrate A and 50µl of Substrate B to each well, mix well.
Incubate for 15 minutes at 18-25°C. Keeping the pla te away from drafts
and other temperature fluctuations in the dark.
6.  Add  50µl  of  Stop  Solution  to  each  well.  If  color  change  does  not
appear uniform, gently tap the plate to ensure thorough mixing.
7.  Determine  the optical density of each well within 10 minutes, using a
microplate reader set to 450 nm.
CALCULATION OF RESULTS
Average the duplicate readings for each standard, control, and sample and
subtract the average zero standard optical density. Create a standard curve
by reducing the data using computer software capable of generating a four
parameter  logistic  （4-PL） curve-fit. As an alternative, construct a standard
curve  by  plotting  the mean  absorbance  for  each  standard  on  the  y-axis
against the concentration on the x-axis and draw a best fit curve through the
points on  the graph. The data may be  linearized by plotting  the  log of  the
HGH concentrations versus the log of the O.D. and the best fit line can be
determined  by  regression  analysis.  This  procedure  will  produce  an
adequate but less precise fit of the data. If samples have been diluted, the
concentration  read  from  the  standard  curve  must  be  multiplied  by  the
dilution factor. 
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LIMITATIONS OF THE PROCEDURE
  The kit should not be used beyond the expiration date on the kit label.
  Do not mix or substitute reagents with those from other lots or sources.
  It is important that the Calibrator Diluent selected for the standard curve
be consistent with the samples being assayed.
  If samples generate values higher than the highest standard, dilute the
samples with the appropriate Calibrator Diluent and repeat the assay.
  Any  variation  in  Standard  Diluent,  operator,  pipetting  technique,
washing  technique,  incubation  time  or  temperature,  and  kit  age  can
cause variation in binding.
  This assay  is designed  to eliminate  interference by soluble  receptors,
binding proteins, and other  factors present  in biological samples. Until
all  factors  have  been  tested  in  the  Quantikine  Immunoassay,  the
possibility of interference cannot be excluded.
TECHNICAL HINTS
  When mixing or reconstituting protein solutions, always avoid foaming.
  To avoid cross-contamination, change pipette tips between additions of
each standard  level, between sample additions, and between  reagent
additions. Also, use separate reservoirs for each reagent.
  When  using  an  automated  plate  washer,  adding  a  30  second  soak
period  following  the  addition  of wash  buffer,  and/or  rotating  the  plate
180 degrees between wash steps may improve assay precision. 
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  To  ensure  accurate  results,  proper  adhesion  of  plate  sealers  during
incubation steps is necessary.
  Substrate  Solution  should  remain  colorless  until  added  to  the  plate.
Keep Substrate Solution protected from light. Substrate Solution should
change from colorless to gradations of blue.
  Stop Solution  should be added  to  the plate  in  the  same order as  the
Substrate Solution. The color developed in the wells will turn from blue
to  yellow  upon  addition  of  the Stop Solution. Wells  that  are  green  in
color indicate that the Stop Solution has not mixed thoroughly with the
Substrate Solution.
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
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人生長激素 人生長激素 人生長激素 人生長激素（GH）酶聯免疫分析 酶聯免疫分析 酶聯免疫分析 酶聯免疫分析
試劑盒使用說明書 試劑盒使用說明書 試劑盒使用說明書 試劑盒使用說明書
本試劑盒僅供研究使用 本試劑盒僅供研究使用 本試劑盒僅供研究使用 本試劑盒僅供研究使用
產品編號 產品編號 產品編號 產品編號： ：： ：CSB-E04567h
檢測范圍 檢測范圍 檢測范圍 檢測范圍： ：： ：2.5 ng/ml – 50 ng/ml
zui低檢測限 zui低檢測限 zui低檢測限 zui低檢測限： ：： ：1 ng/ml
特異性 特異性 特異性 特異性： ：： ：本試劑盒可檢測人 HGH，且與其他相關蛋白無交叉反應。
有效期 有效期 有效期 有效期： ：： ：6 個月
預期應用 預期應用 預期應用 預期應用： ：： ：ELISA 法定量測定人血清、血漿或其它相關生物液體中 HGH
含量。
說明 說明 說明 說明  
1.  濃洗滌液低溫保存會有鹽析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶。  
2.  剛開啟的酶聯板孔中可能會含有少許水樣物質，此為正常現象，不會對實
驗結果造成任何影響。
實驗原理 實驗原理 實驗原理 實驗原理
用*化牛血清白蛋白和親和素包被微孔板，制成固相載體，將已知
濃度的 HGH的標準品、標本加入微孔板中，使其與*標記的 HGH抗體
同時溫育，洗滌后，加入辣根過氧化物酶標記的抗體，再經過溫育和洗滌后
用底物顯色。顏色的深淺和樣品中的 HGH 的濃度成比例關系。用酶標儀在
450nm 波長下測定吸光度（OD值），計算樣品濃度。   
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試劑盒組成及試劑配制 試劑盒組成及試劑配制 試劑盒組成及試劑配制 試劑盒組成及試劑配制  
1.  酶聯板 酶聯板 酶聯板 酶聯板（Assay plate ）：                                                              一塊 （96孔）。   
2.  標準品 標準品 標準品 標準品（Standard）：                                                                      5×1ml/瓶。 
Standard 1  Standard 2  Standard 3  Standard 4  Standard 5
2.5 ng/ml  5 ng/ml  10ng/ml  25 ng/ml  50 ng/ml
3.  酶結合物 酶結合物 酶結合物 酶結合物（HRP-Conjugate）：                                                      1×10ml/瓶。 
4.  *抗體 *抗體 *抗體 *抗體（ （（ （Biotin-antibody） ）） ）                                                    1×6ml/瓶。 
5.  底物溶液 底物溶液 底物溶液 底物溶液 A （ （（ （Substrate A） ）） ）：                                                           1×7ml/瓶。 
6.  底物溶液 底物溶液 底物溶液 底物溶液 B （ （（ （Substrate B） ）） ）：                                                           1×7ml/瓶。   
7.  濃洗滌液 濃洗滌液 濃洗滌液 濃洗滌液 （ （（ （Wash Buffer1×20ml/瓶   使用時每瓶用蒸餾水溶解到 500ml。   
8.  終止液 終止液 終止液 終止液（ （（ （Stop Solution） ）） ）：                                                              1×7ml/瓶。 
需要而未提供的試劑和器材 需要而未提供的試劑和器材 需要而未提供的試劑和器材 需要而未提供的試劑和器材
1.  標準規格酶標儀
2.  高速離心機
3.  電熱恒溫培養箱
4.  干凈的試管和 Eppendof 管
5.  系列可調節移液器及吸頭，一次檢測樣品較多時，用多通道移液器
6.  蒸餾水，容量瓶等
標本的采集及保存 標本的采集及保存 標本的采集及保存 標本的采集及保存  
1.  血清：全血標本請于室溫放置2小時或4℃過夜后于1000g離心20分鐘，
取上清即可檢測，或將標本放于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。  
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2.  血漿：可用 EDTA 或肝素作為抗凝劑，標本采集后 30 分鐘內于 2  -  8°C
1000 g離心 15 分鐘，或將標本放于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍
融。
注 注注 注： ：： ：以上標本置 以上標本置 以上標本置 以上標本置 4℃ ℃℃ ℃保存應小于 保存應小于 保存應小于 保存應小于 1 周 周周 周， ，， ，-20℃ ℃℃ ℃或 或或 或-80℃ ℃℃ ℃均應密封保存 均應密封保存 均應密封保存 均應密封保存， ，， ，-20℃ ℃℃ ℃不應超過 不應超過 不應超過 不應超過 1 個 個個 個
月 月月 月， ，， ，-80℃ ℃℃ ℃不應超過 不應超過 不應超過 不應超過 2 個月 個月 個月 個月； ；； ；標本溶 標本溶 標本溶 標本溶血會影響zui后檢測結果 血會影響zui后檢測結果 血會影響zui后檢測結果 血會影響zui后檢測結果， ，， ，因此溶血標本不宜進行檢 因此溶血標本不宜進行檢 因此溶血標本不宜進行檢 因此溶血標本不宜進行檢
測 測測 測。 。。 。
操作步驟 操作步驟 操作步驟 操作步驟
1.  將各種試劑至室溫〔18-25℃〕平衡半小時，取濃縮洗滌液，根據當批檢
測數量，用蒸餾水上 1：10 稀釋，混勻后備用。
2.  將酶標板取出，分別向孔中加入 50ul標準品、標本，再分別加入 50ul生
物素化抗體，震動 10-20 秒混勻，置 37℃孵育 30 分鐘。
3.  手工洗板，棄去孔內液體。洗滌液注滿各孔，靜置 10 秒甩干，重復三次
后拍干；洗板機洗板，選擇洗滌三次程序，洗板后拍干。
4.  每孔加入 100ul酶結合物，震動 10-20 秒混勻，置 37℃孵育 30 分鐘。
5.  手工洗板，棄去孔內液體。洗滌液注滿各孔，靜置 10 秒甩干，重復三次
后拍干；洗板機洗板，選擇洗滌三次程序，洗板后拍干。
6.  每孔加顯色劑 A 液 50µl，顯色劑 B 液 50µl，振蕩混勻后，18-25℃避光
顯色 15 分鐘，每孔加終止液 50µl。
7.  用酶標儀讀數，取波長 450nm，先用空白孔調零點，然后測定各孔 OD
值。
數據處理 數據處理 數據處理 數據處理
1.  手工作圖：用雙對數坐標紙，以標準品濃度為橫軸，以對應的 0D值為縱
軸，畫出平滑曲線或直線，在曲線上按照待測血清 OD值找到對應的濃度
值。
2.  計算機：使用線性擬合功能，應將標準品 S1-S5 的濃度取對數（Log（濃
度））作為 X，將對應的 OD值減去空白對照孔 OD值后取對數（Log（OD
值-NSB））作為 Y，進行線性擬合。再從擬合線上計算出待測血清濃度。 
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注意事項 注意事項 注意事項 注意事項
1.  從冷藏環境中取出的試劑盒內全部瓶裝試劑及所需預包被板條應置室溫
（18-25℃）平衡 30 分鐘后方可使用，余者應及時封好口，放回 2-8℃中避
光保存，以備后用。
2.  使用前試劑應搖勻。
3.  結果判斷須在反應終止后 10 分鐘內完成。
4.  不同批號的試劑不可混用。
5.  加樣時應注意避免所用各試劑及樣品之間的交又污染。
6.  操作時，試劑盒內每種試劑各使用一個吸頭，每一種標準品使用一個吸頭，
每一個樣品各使用一個吸頭，吸頭一次性使用。
7.  每次測試必須重新制作標準曲線，上次實驗標準曲線不可重復使用。     
 
 
 

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