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水稻內標準gos9基因LAMP試劑盒反應五要素

時間:2022/12/20閱讀:792
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水稻內標準gos9基因LAMP試劑盒反應五要素:


參加PCR反應的物質主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+


引物:引物是PCR特異性反應的關鍵,PCR 產物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設計互補的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設計引物應遵循以下原則:


①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。


②引物擴增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴增長至10kb的片段。


③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴增效果不佳,G+C過多易出現非特異條帶。ATGC*隨機分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。


④避免引物內部出現二級結構,避免兩條引物間互補,特別是3'端的互補,否則會形成引物二聚體,產生非特異的擴增條帶。


⑤引物3'端的堿基,特別是最末及倒數第二個堿基,應嚴格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導致PCR失敗。


⑥引物中有或能加上合適的酶切位點, 被擴增的靶序列*有適宜的酶切位點, 這對酶切分析或分子克隆很有好處。


⑦引物的特異性:引物應與核酸序列數據庫的其它序列無明顯同源性。


引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以*引物量產生所需要的結果為好,引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增,且可增加引物之間形成二聚體的機會。

葡萄糖銨培養基100g用于鑒別細菌利用銨鹽作為氮源并分解葡萄糖的試驗。

尿素瓊脂培養基基礎250g用于鑒別腸道菌尿素酶試驗

緩沖動力-硝酸鹽培養基250g供產氣莢膜梭菌動力和硝酸鹽還原測定用

動力—硝酸鹽培養基(A法)250g供鑒別測定細菌液化明膠用

明膠培養基(營養明膠)100g供測定細菌液化明膠使用

克氏雙糖鐵瓊脂250g用于鑒別腸道菌發酵葡萄糖和乳糖,及產生硫化氫的生化反應。(ISO)

水解酪蛋白胨(MH)瓊脂250g適用于擴散法進行藥敏試驗。

水解酪蛋白胨(MH)肉湯100g適用于稀釋法進行藥敏試驗。

高氏合成1號瓊脂培養基250g供放線菌培養用。

馬鈴薯葡萄糖半固體瓊脂250g用于椰毒假單胞菌酵米面亞種的產毒培養

馬鈴薯葡萄糖水250g用于椰毒假單胞菌酵米面亞種的檢驗。(GB)

GVC增菌液250g用于椰毒假單胞菌酵米面亞種的增菌培養基

馬鈴薯葡萄糖瓊脂(椰毒假單胞)250g用于椰毒假單胞菌酵米面亞種的計數和分離

亞碲酸鉀(四號瓊脂凍干配套試劑)5mg/支x10每支添加于500ml(025030)中配成四號瓊脂培養基。

弧菌顯色培養基選擇性添加劑凍干試劑10支每支添加于100ml(CRM008)弧菌顯色培養基中。

Skirrow瓊脂配套試劑10支/盒每支添加于100mL的 Skirrow瓊脂基礎中

改良CCD瓊脂配套試劑10支/盒每支添加于100ml(022212)中配成MLST

Bolton肉湯配套試劑10支/盒每支添加于100mL的 Bolton 肉湯基礎中

10支/盒每支添加于100ml(022212)中配成MLST

亞碲酸鉀(亞碲酸鹽肉湯凍干配套試劑)2mg/支x10每支添加于100ml(022011)中配成亞碲酸鹽肉湯。



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