狂犬G蛋白(GP)標(biāo)記抗體狂犬病主要是通過被狂犬病毒感染的動(dòng)物的撕咬、抓撓受傷而傳播。在中國,狂犬病的主要傳播來源是被RABV感染的狗和貓等。當(dāng)前,對于狂犬病感染或發(fā)病后的治療方法尚未實(shí)現(xiàn),因而及時(shí)接種狂犬病疫苗可在很大程度上有效防制狂犬病。目前我國動(dòng)物用狂犬病疫苗主要是傳統(tǒng)滅活疫苗和弱毒疫苗,弱毒疫苗存在返毒的危險(xiǎn),而滅活疫苗則存在滅活不*的風(fēng)險(xiǎn)。基因工程亞單位疫苗由于不含有強(qiáng)毒的感染性組分,所以不必進(jìn)行滅活措施,是新型疫苗研究的重要發(fā)展方向。G(glycoprotein)蛋白是狂犬病毒的五種組成蛋白之一,由524個(gè)氨基酸組成,蛋白分子質(zhì)量約為62KD。G蛋白是狂犬病毒中糖基化的,以及可誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生中和抗體的結(jié)構(gòu)蛋白。因此,G蛋白既是狂犬病毒中有效的保護(hù)性抗原,同時(shí)也是研究基因工程亞單位疫苗的抗原,是狂犬病基因工程亞單位疫苗研究的熱點(diǎn)。本課題研究中,利用狂犬病病毒CTN-1V10株為模板,以生物工程合成的方法合成編碼G蛋白的基因片段G。將該片段插入大腸桿菌pET-28a載體中,構(gòu)建重組質(zhì)粒,構(gòu)建完成后,將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化入大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞BL21(DE3)表達(dá)目的蛋白,SDS-PAGE電泳及Western blot結(jié)果表明,重組蛋白在大腸桿菌系統(tǒng)中實(shí)現(xiàn)了大量可溶性表達(dá),在此基礎(chǔ)上,進(jìn)一步對該蛋白的反應(yīng)原性和免疫原性進(jìn)行了研究與分析。首先以狂犬病病毒CTN-1V10株(Genebank:AEV43285)為模板,設(shè)計(jì)相應(yīng)的特異性引物,以生物工程合成的方法合成編碼G蛋白的基因片段G,片段大小為1884bp。

狂犬G蛋白(GP)標(biāo)記抗體

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